En comparación con el método de capping enzimático en dos pasos, el método de capping co-transcripcional en un solo paso puede reducir significativamente el flujo del proceso. El método está orientado al resultado y consiste en la adición de análogos de cap a la reacción de transcripción in vitro (IVT). Los análogos de cap pueden ser introducidos al inicio de la transcripción, y se obtiene mRNA con estructura de cap al finalizar la transcripción. Los actuales análogos de cap de tercera generación pueden evitar el capping inverso y añadir directamente la estructura Cap 1 al producto de transcripción.
Para consideraciones de inmunogenicidad in vivo del mRNA y eficiencia de traducción, el proceso IVT a menudo adopta ciertos tipos de NTPs modificados, y los nucleótidos modificados comunes son pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouridina (N1Ψ) y 5-metilcitosina (5mC).
Figura: Diagrama de la Reacción Co-transcripcional y de Capping del mRNA
Detalles del Servicio
Servicio |
Detalles del Servicio |
Período de Entrega (día laborable) |
Capping co-transcripcional |
Respuesta de transcripción in vitro (Análogo Clean Cap) |
1-2 |
| Modificaciones de nucleótidos (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Eliminación de la plantilla de ADN (DNasa I) |
Optimización de condiciones IVT - opcional |
Diseño y optimización de componentes de reacción |
3-7 |
Nuestras características
- Estrategias Diversificadas de Modificación de Nucleótidos
Múltiples estrategias opcionales de modificación de nucleótidos pueden mejorar la expresión de proteínas.
- Sistema de Reacción Optimizado
Lograr una alta proporción de transcripción y una alta eficiencia de capping.
- Proceso de Capping Estable
Lograr una tasa de capping superior al 95%.
- Control Estricto de RNasa
Prevenir efectivamente la degradación de mRNA mediante un control estricto de la RNasa en el entorno experimental y los consumibles.
Estudio de Caso
Yaohai Bio-Pharma ha desarrollado una plataforma madura de capping co-transcripcional, utilizando análogos de cap limpios para añadir directamente la estructura Cap1 mientras se evita el capping inverso. Después de un tratamiento estándar de muestras y detección por electroforesis capilar (CE), la tasa de capping del mRNA de la proteína de fluorescencia verde mejorada (eGFP) puede alcanzar más del 95%.
eficiencia de capping del mRNA de eGFP superior al 95%
El ARN mensajero de eGFP y el ARN mensajero de mCherry preparados mediante la tapado co-transcripcional son transfectados en las células 293T, respectivamente, y se observa una fuerte señal fluorescente después de 48h, lo que sugiere que el ARN mensajero se expresa eficientemente en las células 293T.
Expresión del ARN mensajero de eGFP y mCherry en la Célula 293T
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