La Importancia de la Selección de Cepas
La selección de hospedadores adecuados es necesaria para el desarrollo de CMC de biológicos, lo que determina la calidad y consistencia del producto y del proceso de fabricación. El objetivo directo de la selección de hospedador es proporcionar un banco primario de células (PCB) candidato, con altos niveles de expresión y alta estabilidad tanto en términos de estabilidad por pasaje como de estabilidad en almacenamiento. La selección de un hospedador adecuado es necesaria por dos razones principales:
- En primer lugar, seleccionar el hospedador microbiano con un alto nivel de expresión. Existen múltiples cepas comerciales, que se utilizan para expresar diferentes tipos de proteínas, como proteínas tóxicas, proteínas solubles o proteínas eucariotas.
- En segundo lugar, para evaluar al huésped con estabilidad genética. La prueba de estabilidad genética es un punto clave a lo largo del ciclo de vida de producción. Se sugiere que una alta estabilidad genética se considere como otra característica clave para la cepa adecuada.
Palabras clave: selección de cepas microbianas, tamizado de cepas microbianas, tamizado de alto rendimiento de bacterias o levaduras, tamizado de cepas de alta producción, tamizado de cepas altamente estables, tamizado de cepas genéticamente estables Aplicación: medicina humana, medicina veterinaria, vacunas, biología sintética, biológicos moleculares recombinantes grandes, reagentes biológicos
Servicios de Tamizado de Cepas de Yaohai Bio-Pharma
Beneficiándonos de más de 10 años de experiencia en CDMO en biológicos microbianos, apoyamos el desarrollo y la fabricación de varias moléculas grandes, incluidas vacunas recombinantes de subunidades, partículas similares a virus (VLP), hormonas (insulina, GLP-1, hormona del crecimiento), citocinas (Interleucina-2/IL-2, IL-15, IL-21), factores de crecimiento (EGF, FGF, NGF), nanocuerpos/cuerpos simples (sdAbs), enzimas, etc.
Hemos acumulado experiencias valiosas en la selección de varios tipos de vectores plasmídicos y hospederos microbianos, incluyendo Bacterias Escherichia coli (E. coli), y levadura Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha). Podemos encontrar el mejor sistema de expresión para sus biológicos únicos.
Hemos recolectado varios hospederos microbianos con fuentes claras y CoA estándar, incluyendo E.Coli expresión bacteriana y expresión de levadura.
Detalles del Servicio
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Servicios
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Detalles del Servicio
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Cronograma mínimo/día
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Entregables
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Construcción de cepas (E. coli)
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Transformación de plásmidos (multi-anfitriones)
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5
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COA de anfitriones comerciales Informe de construcción de cepas
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Verificación por PCR
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Purificación de cepas
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Preservación de cepas
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Construcción de cepas (levadura)
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Preparación de células competentes de levadura
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10
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Linealización de plásmidos
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Transformación electrofórica
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Pantalla de resistencia\/deficiencia nutricional
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Purificación de cepas
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Preservación de cepas
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Pantalla de hospedador adecuado
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Extracción de ADN plasmidial o genómico
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entre 15 y 20
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Proceso de pantalla del hospedador COA de cepas ingenierizadas
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Verificación por PCR, digestión con enzima de restricción
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Secuenciación de Gen Objetivo
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Pantalla de hospedadores de alta expresión
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Pantalla de hospedadores con estabilidad genética
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Preservación de cepas
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Estudio de Caso
Un hospedador adecuado mejora el nivel de expresión de proteínas en 2.5 veces.
Estamos encargados de desarrollar cepas de alta producción E. coli y probamos tres tipos de hospederos comerciales E. coli en función de las características de la proteína objetivo. Se mostró que las cepas S1-1 y S1-2 (Fig A: Línea 1,2) mejoraron el nivel de proteína en 3.5 veces más que la cepa inicial del cliente (Fig A: Línea 3).
Además, la cepa S1-1 mostró una alta estabilidad genética (Fig B), y fue reconocida como cepa candidata para la creación del banco primario de células (PCB).
Características de Nuestro Servicio
Demostrada experiencia con diversos hospederos microbianos, por ejemplo, E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; S. cerevisiae y H. polymorpha .
Tenemos experiencia en E. coli secreción periplasmática, expresión soluble y de cuerpos de inclusión, así como expresión intracelular o de secreción en levaduras. No agregamos antibióticos o los agregamos bajo la guía regulatoria.
Establecemos una plataforma de tamizado de alta throughput para seleccionar cepas de alta producción y estables entre más de cien cepas candidatas.
Se asegura que el proceso de ingeniería y selección de cepas sea rastreable, bajo la Buena Gestión de Datos y Registros.
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