La desamidación de las cadenas laterales de la glutamina y la asparagina es una modificación común en términos de impacto en las propiedades de los biofármacos proteicos. La desamidación puede ocurrir en residuos de glutamina, pero generalmente a una tasa mucho menor. Las tasas de desamidación se ven influenciadas por la temperatura, el pH, la estructura local de la proteína y los residuos de aminoácidos adyacentes.
Yaohai BioPharma ofrece un servicio de prueba de desamidación de ácidos aminados, que le permite detectar la desamidación de ácidos aminados mediante Cromatografía Líquida-Espectrometría de Masas (LC-MS).
Hemos estado involucrados en la Caracterización Estructural de Proteínas de varias grandes moléculas, incluidas Vacunas de Subunidad Recombinantes, Nanocuerpos/VHHs/Anticuerpos de Dominio Único (sdAbs), Fragmentos de Anticuerpos, Hormonas/Péptidos, Citocinas, Factores de Crecimiento (CF), Enzimas, Colágenos, etc.
Requisitos Regulatorios para la Desamidación de Ácidos Aminados
De acuerdo con las directrices ICH Q6B, las formas deamidadas pueden ser detectadas y caracterizadas mediante métodos analíticos cromatográficos, electroforéticos y/o otros relevantes.
Métodos Analíticos
| Análisis |
Métodos |
| Deamidación |
Cromatografía Líquida acoplada a Espectrometría de Masas (LC-MS) |
Procedimientos
p. ej., deamidación de ácido aspártico
1. Digestión enzimática
2. LC-MS bajo la condición de Cromatografía Líquida de Alta Rendimiento (HPLC)
3. Análisis de datos
La deamidación de asparagina ocurre mediante un intermediario succionímido (Suc), que es susceptible a racemización e hidrólisis, produciendo cuatro isómeros de Asp, incluyendo L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp y D-IsoAsp.
En teoría, la deamidación de Gln podría generar cuatro isómeros correspondientes de Glu a través de un proceso similar a la deamidación de Asn.
La espectrometría de masas de alta resolución identifica fácilmente la diferencia de masa de 1 Da entre los péptidos que contienen Asn/Gln y sus correspondientes contrapartes desamidadas Asp/Glu.
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