La desamidación de las cadenas laterales de glutamina y asparagina es una modificación común en términos de impacto en las propiedades de los productos biofarmacéuticos proteicos. La desamidación puede ocurrir en los residuos de glutamina, pero generalmente a un ritmo mucho menor. Las tasas de desamidación están influenciadas por la temperatura, el pH, la estructura de la proteína local y los residuos de aminoacilo flanqueantes.
Yaohai BioPharma ofrece un servicio de prueba de desamidación de aminoácidos, que le permite detectar la desamidación de aminoácidos mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS).
Hemos estado involucrados en la caracterización estructural de proteínas de varias moléculas grandes, incluidas vacunas de subunidades recombinantes, nanocuerpos/VHH/anticuerpos de dominio único (sdAb), fragmentos de anticuerpos, hormonas/péptidos, citocinas, factores de crecimiento (FQ), enzimas, colágenos. etc.
Requisitos reglamentarios para la desamidación de aminoácidos
Según las directrices ICH Q6B, las formas desamidadas pueden detectarse y caracterizarse mediante métodos cromatográficos, electroforéticos y/u otros métodos analíticos relevantes.
Métodos analíticos
| Analisis |
Métodos |
| desamidación |
Cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS) |
Procedimientos
por ejemplo, desamidación del aspártico
1. Digestión enzimática
2. LC-MS en condiciones de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC)
3. Análisis de los datos
La desamidación de la asparagina se produce a través de un intermediario succinimida (Suc), que es susceptible a la racemización y la hidrólisis, produciendo cuatro isómeros de Asp, incluidos L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp y D-IsoAsp.
En teoría, la desamidación de Gln podría generar cuatro isómeros de Glu correspondientes mediante un proceso similar a la desamidación de Asn.
La espectrometría de masas de alta resolución identifica fácilmente la diferencia de masa de 1-Da entre los péptidos que contienen Asn/Gln y sus correspondientes homólogos desamidados Asp/Glu.
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