Enzimas para la producción de mRNA

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Enzimas para la producción de RNA

Enzimas clave para la producción de RNA largo

el mRNA, como un tipo de RNA de codificación largo, se desempeñó de manera segura y eficiente en un rango más amplio de personas durante la pandemia de COVID-19. Otros RNAs de codificación larga, como el RNA autoamplificante (saRNA) y el mRNA circular (circRNA), también mostraron eficiencia en estudios preclínicos y clínicos.

La producción a gran escala de RNA de codificación largo depende de la transcripción in vitro (IVT) mediante varias reacciones enzimáticas. Los pasos de la producción de RNA incluyen la preparación del ADN plantilla, la síntesis de RNA por IVT, la circulación, la eliminación de ADN, la modificación de RNA (cubrimiento y colas) y la purificación de RNA.

Existen varias enzimas clave utilizadas en la producción de RNA de codificación largo (por ejemplo, mRNA, saRNA y circRNA), incluyendo endonucleasas de restricción, polímero T7 RNA (T7 RNAP), inhibidor de RNasa, pirrofosfatasa inorgánica, DNasa I, enzima de capping de vacinia y RNasa R.

Proceso	Enzima	Función
Preparación del ADN plantilla	Endonucleasas de restricción	Linealización del ADN plasmidial (pDNA) para evitar la generación de un transcrito más largo.
Síntesis de ARN por IVT	Polimerasa de ARN T7 (T7 RNAP)	Unirse al promotor T7 y generar el transcrito de ARN específico; Desempeñar un papel clave durante la reacción de IVT.
	Inhibidor de RNasa, recombinante	Inhibir la actividad de RNasa durante la reacción de IVT.
	Pirofosfatasa, inorgánica (iPPase)	Prevenir la pirofosfata durante la reacción de IVT.
Eliminación de ADN	DNasa I	Elimine la plantilla de ADN.
Modificación de ARN	Enzima de capping de vacina	Añada estructuras Cap1 a los extremos 5′ del ARN mensajero sintetizado in vitro (IVT).
Modificación de ARN	2’-O-Metiltransferasa
Enriquecimiento de circRNA	No se puede	Degrada el ARN lineal y enriquece el ARN circular.

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