Galvenie eņzīmi garas RNA ražošanai
mRNA, kā viena no garajām kodējošajām RNA veidu, darbojās droši un efektīvi plašākā cilvēku grupā laikā, kad cīnījās ar COVID-19. citas garās kodējošās RNA, piemēram, pašaizplatīgošā RNA (saRNA) un apļveida mRNA (circRNA), arī parādīja efektivitāti pirmskliniskajos un kliniskajos pētījumos.
Garās kodējošās RNA lielmai mērogā ražošana atkarīga no in vitro transkripcijas (IVT) dažādu eņzīmu reakciju palīdzībā. RNA ražošanas soļi ietver šablonu DNA sagatavošanu, IVT RNA sintēzi, cirkulāciju, DNA noņemšanu, RNA modifikāciju (kapotēšanu un hvalu pievienošanu) un RNA tīrīšanu.
Daži no galvenajiem eņzīmiem, kas tiek izmantoti garās kodējošās RNA (piemēram, mRNA, saRNA un circRNA) ražošanā, ieskaitot apribojošos endonukleazu, T7 RNA polimerāzu (T7 RNAP), RNAs inhibitoru, neorganisko pirifosfātu, DNase I, vakcinjas kapotēšanas eņzīmu un RNase R.
Procesus
|
Eozīms
|
Funkcija
|
Šablonu DNA sagatavošana
|
Restrikcijas endonukleāzi
|
Plazmidu DNA (pDNA) lineārizācija, lai novērstu garāku transkripta veidošanos.
|
IVT RNA sintēze
|
T7 RNA polimerāze (T7 RNAP)
|
Saistīties ar T7 promotoru un radīt specifiskus RNA transkriptus; Atspēlē būtisku lomu IVT reakcijas laikā.
|
RNase inhibītors, rekombinants
|
Inhibēt RNase aktivitāti laikā IVT reakcijai.
|
Pirofosfatāze, neorganiskā (iPPase)
|
Novērst pirofosfātu laikā IVT reakcijai.
|
DNA noņemšana
|
DNase I
|
Noņemt DNS šablonu.
|
RNA modifikācija
|
Vaksīnijas cappējošais enzīms
|
Pievienojiet Cap1 struktūras IVT mRNA 5′ galu.
|
2’-O-Metiltransferāze
|
circRNA apmierinājums |
RNase R |
Deglint lineāro RNA un apmierināt cirkulāro RNA. |
Yaohai Bio-Pharma piedāvā viena punkta CDMO risinājumu enzīmiem