Pakārtotā procesa (DSP) attīstības nozīme
Viss fermentācijas buljons satur mērķa proteīnu vai plazmīdu, kā arī ar produktu un procesu saistītus piemaisījumus, piemēram, agregātus, mikrobu šūnu substrātus, saimniekšūnu proteīnus (HCP), saimniekšūnas DNS (HCD), endotoksīnu un antibiotikas.
Tāpēc ir ļoti svarīgi izstrādāt efektīvu DSP, attīrīšanas procesu, lai noņemtu noteiktus piemaisījumus un ražotu ļoti attīrītu un augstas kvalitātes zāļu vielu. Turklāt attīrīšanas procesa optimizācija var palīdzēt palielināt produktu atgūšanu, samazināt izmaksas un uzlabot procesa mērogojamību un reproducējamību.
Atslēgvārdi: procesa izstrāde, optimizācija un validācija, attīrīšanas process, hromatogrāfija, piemaisījumu likvidēšana, HCP noņemšana, HCD eliminācija, endotoksīnu noņemšana, proteīnu denaturācija un pārlocīšana, VLP montāža, konjugācija
Pielietojums: Biofarmācijas rūpniecība, cilvēku medicīna, dzīvnieku medicīna, vakcīna, rekombinantās lielas molekulas bioloģiskās vielas, rekombinantās bioloģiskās vielas, bioloģiskais reaģents
Yaohai Bio-Pharma DSP risinājumi
Mums ir liela pieredze mērķa proteīnu vai plazmīdu izolēšanā no sarežģītām matricām, izstrādājot un optimizējot pakārtoto attīrīšanas procesu. Bioloģisko vielu attīrīšanai ir piemēroti dažādi vienību operāciju veidi, tostarp centrifugēšana, filtrēšana, homogenizācija, sārmaina līze, ultrafiltrācija, izgulsnēšana, olbaltumvielu denaturēšana un pārlocīšana, hromatogrāfija utt.
Mūsu pieejamie attīrīšanas izstrādes pakalpojumi ietver:
- Visa attīrīšanas procesa izstrāde no šūnu vai supernatanta savākšanas līdz galīgajai aktīvajai sastāvdaļai.
- Attīrīšanas procesa optimizācija, pamatojoties uz ar produktu un procesu saistītiem piemaisījumiem, lai paaugstinātu produkta kvalitāti un drošību, piemēram, HCP, HCD, endotoksīnu.
- Galveno parametru definēšana un optimizēšana vienā vai vairākās vienības operācijās, tostarp šūnu lizē, tangenciālās plūsmas filtrācijā, sveķu skrīningā, hromatogrāfijā, proteīnu denaturācijā un pārlocīšanā utt.
- Procesa optimizācija kvalitātes, ražas, reģenerācijas, izmaksu un mērogojamības ziņā.
- Pakārtotā attīrīšanas procesa apstiprināšana.
- Uz risku balstīta parametru diapazona novērtēšana un eksperimentu plānošana (DoE) procesu modelēšanā.
Informācija par pakalpojumu
Standartizētas olbaltumvielu vai plazmīdu attīrīšanas platformas ir balstītas uz vairākiem neapstrādātiem attīrīšanas posmiem un mazāk nekā 4 hromatogrāfijas posmiem, tostarp uztveršanu, starpposma attīrīšanu un pulēšanu.
| Informācija par pakalpojumu |
Vienības darbība |
parametri |
| Neapstrādāta attīrīšana |
Centrifugēšana |
Rotācijas ātrums, laiks |
| Augstspiediena homogenizācija |
Kopējais cieto vielu saturs, spiediens, cikli |
| Nepārtraukta sārmaina līze |
Atkārtoti suspendēto šūnu attiecība pret līzes šķīdumu, līzes laiks |
| Tangenciālās plūsmas filtrēšana |
Membrānas materiāls un poru izmērs, padeves plūsmas ātruma transmembrānas spiediens (TMP), filtra tilpuma attiecība pret membrānas laukumu |
| Nokrišņi |
Nogulsnes veids un koncentrācija, piedeva, pH, temperatūra, laiks |
| Denaturācija un pārlocīšana |
Iekļaušanas ķermeņa olbaltumvielu šķīdināšana |
Denaturantu koncentrācija (piemēram, urīnviela, guanidīna HCl, spēcīgs jonu mazgāšanas līdzeklis), mazgāšanas līdzekļi (piemēram, nātrija dodecilsulfāts, SDS), reducējošie līdzekļi (piemēram, ditiotreitols, DTT), helātu veidotāji (etilēndiamīntetraetiķskābe, EDTA), temperatūra, laiks |
| Olbaltumvielu pārlocīšana |
Pārlocīšanas metodes (atšķaidīšana, dialīze vai SEC pārlocīšana), olbaltumvielu koncentrācija, buferi, pH, temperatūra, laiks, oksidētāji un reducējošie līdzekļi (piemēram, glutations, GSH/oksidēts glutations, GSSH, DTT/GSSH, cisteīns/cistīna piedevas). (L-arginīns, urīnviela, guanidīns/HCl un mazgāšanas līdzekļi) |
| Uztveršana, starpposma attīrīšana un pulēšana |
AC (afinitātes hromatogrāfija) |
Vairāki hromatogrāfijas sveķu/kolonnu veidi (piemēram, AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), kolonnas garums un diametrs, bufera sastāvs, injekcijas tilpums, kustīgās fāzes sastāvs (adsorbcija un desorbcija), pH, plūsmas ātrums, saistīšanās, Mazgāšanas un eluēšanas apstākļi. |
| IEX (anjonu vai katjonu apmaiņas hromatogrāfija) |
| HIC (hidrofobās mijiedarbības hromatogrāfija) |
| Atsāļošanas un/vai izmēra izslēgšanas hromatogrāfija (SEC) |
| RPC (apgrieztās fāzes hromatogrāfija) |
| MMC, jauktā režīma hromatogrāfija |
Gadījuma izpēte
Lieta 1
Mums ir uzdots izstrādāt un optimizēt pakārtoto attīrīšanas procesu, lai palielinātu proteīna tīrību no 85% līdz 90%, vienlaikus samazinot hromatogrāfijas posmus.
Yaohai nodrošināja spēcīgu un mērogojamu attīrīšanas procesu ar 3 hromatogrāfijas posmiem mērķa proteīnam, baktēriju alerģijai. Un galīgā tīrība sasniedza 95%.
Lieta 2
Mūsu klients iecēla Yaohai, lai optimizētu vīrusam līdzīgo daļiņu (VLP) vakcīnas endotoksīnu noņemšanas procesu.
Mūsu komanda veica hromatogrāfijas parametru optimizāciju un sagatavoja zāļu vielu ar tīrību 98% un endotoksīna atlikumu 12.8 EU/mg.
Mūsu pieredze
- Mēs esam bijuši iesaistīti dažādu lielu molekulu izstrādē un ražošanā, tostarp rekombinantās apakšvienību vakcīnas, VLP, hormoni (insulīns, GLP-1, augšanas hormons), citokīni (Interleikīns-2/IL-2, IL-15, IL-21). ), augšanas faktori (EGF, FGF, NGF), nanoķermeņi/viena domēna antivielas (sdAb), fermenti utt.
Iekārta
Mēs izmantojam nozarē vadošās AKTA Pure, AKTA Avant un Preparative HPLC sistēmas dažādu hromatogrāfijas metožu veikšanai, tostarp afinitātes, jonu apmaiņas, hidrofobās mijiedarbības, reversās fāzes un izmēru izslēgšanas hromatogrāfijā.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
