Datu informācija par peptīdu kartēšanu, balstoties uz kapilāro cromatografiju-maspektrometriju (LC-MS), nodrošinās daudzu informācijas apjoma par nativu un rekombinantu proteīnu pamata un augstākā līmeņa struktūru, tostarp aminoskābes secības segvērumu, pēc sintēzes notiekošajiem modifikācijām (PTMs, piemēram, gleikoze, oksidācija, deamidācija), disulfīda saites utt.
Yaohai Bio-Pharma piedāvā peptīdu kartēšanas analīzi jūsu mērķa proteīnam ar LC-MS, lai paātrinātu jūsu pētījumus par proteīna struktūru.
Mēs esam iesaistīti dažādu lielo molekulu, tostarp Rekombinantu Subūnas vakcinu, Nanocorpusi/VHHs/Vienkāršo anticorpuss (sdAbs), Anticorpju fragmentu, Hormonu/Peptīdu, Citoķīnu, Augstas faktoru (GF), Enzīmu, Kolaģēnu utt. Proteīnu struktūras raksturošanā.
Regulatīvie prasības peptīdu kartēšanai
ICHQ6B norāde ieteic, „Izvēlētais produkta sadalījums atsevišķos peptīdjos ir veikts, izmantojot piemērotus enzīmus vai ķīmiskos vielas, un iegūtie peptīda fragmenti tiek analizēti ar HPLC vai citu piemēroto analītisko procedūru. Peptīda fragmentiem jāidentificē tik plaši iespējams, izmantojot tehnoloģijas, piemēram, aminoskābju sastāva analīzi, N-termiņa sekotnei noteikšanu vai masu spektrometriju (MS). Aktīvās vielas vai medicīniskās produktu (DP) peptīdu kartēšana, izmantojot piemēroti validētu metodi, bieži tiek izmantota, lai apstiprinātu vēlamo produkta struktūru partijas atbrīvošanai.”
Analītiskie metodi
| Analīze |
Metodes |
| Pepidu kartēšana |
Proteāzu digestija un kapilārā cirkulācijas-masu spektrometrisks (LC-MS) analīzes metode |
Analītiska procedūra
1. Redukcija un alquilēšana
Mērķis ir samazināt disulfīda tiltus un bloķēt radīto brīvo tiolu. Disulfīda tiltu samazināšana palīdz atvērt olbaltumvielu struktūru, kas padara proteolītisko dažādošanos efektīvāku. Šajā posmā arī tiks pārtraukti tilti starp virknēm gadījumā, ja ir daudzvirknes olbaltumvielas ar disulfīda tiltiem starp virknēm (piem., monoklonie antikorpuss, mAbs).
2. Olbaltumvielas dažādošana izmantojot enzīmus
Mērķis ir sadalīt olbaltumvielas peptīdēs. Mēs atlasām enzīmus pamatojoties uz teorētisko olbaltumvielas secību un zināšanām par teorētisku olbaltumvielas dažādošanu ar enzīmiem. Enzīmu atlasīšana šādiem kritērijiem paredzēta, lai iegūtu labāko peptīdu kartēšanas analīzi.
3. Dažādotās peptīdu analīze Izmantojot On-line Reversētā fāzes - Augstas rentabilites dzimuma krāsošanu ar Ultravioletu (UV) un Elektrosprauga-Masa spektrometriju detekciju (LC/ES-MS).
Peptīdu atdalīšana pamatojoties uz polārību, izmantojot LC (reversētā fāze-LC)
Kā peptīds izplūst no LC kolonnas, masa spektrometrs ģenerēs masas informāciju kopā ar fragmenta jonu informāciju, kas mums atvieglo secības informācijas noteikšanu. Mēs izmantojam secības informāciju, lai apstiprinātu peptīda identitāti un nodrošinātu pamatinformāciju.
Mēs varētu arī iegūt fragmentācijas informāciju no peptīdiem, kad tie ienāk masa spektrometra avotā no LC kolonnas. Atkarībā no pētījuma prasībām, tas ir vai nu selektīvs LC-MS/MS vai neoselektīvs, kas var tikt uzskatīts par vienu no tandema MS veidiem.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
