Rekombinantajās olbaltumvielās bieži notiek atklātu aminoskābju sānu ķēžu, piemēram, triptofāna (Trp) un metionīna (Met), oksidēšanās, mainot proteīnu fizikāli ķīmiskās īpašības. Šīs izmaiņas savukārt var veicināt ietekmēto proteīnu bioloģisko funkciju izmaiņas, piemēram, saistīšanās zudumu, fermentatīvās aktivitātes samazināšanos, negaidīti ātru klīrensu. Olbaltumvielas ir svarīgi oksidatīvo reakciju mērķi, jo tie ātri reaģē ar oksidētājiem un ir daudz šūnās, ārpusšūnu audos un ķermeņa šķidrumos.
Tāpēc veiksmīgai biofarmaceitiskajai attīstībai ir izšķiroša nozīme olbaltumvielu oksidācijas uzraudzībā.
Yaohai Bio-Pharma piedāvā aminoskābju oksidācijas analīzes pakalpojumu, kas ļauj noteikt aminoskābju oksidāciju, izmantojot šķidruma hromatogrāfijas-masas spektrometriju (LC-MS).
Mēs esam bijuši iesaistīti dažādu lielu molekulu, tostarp rekombinanto apakšvienību vakcīnu, nanoķermeņu/VHH/ viena domēna antivielu (sdAb), antivielu fragmentu, hormonu/peptīdu, citokīnu, augšanas faktoru (GF), enzīmu, strukturālajā raksturojumā. utt.
Normatīvās prasības aminoskābju oksidēšanai
Saskaņā ar ICH Q6B vadlīnijām oksidētās formas var noteikt un raksturot ar hromatogrāfiskām, elektroforēzes un/vai citām atbilstošām analītiskām metodēm (piemēram, augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfiju (HPLC), kapilāro elektroforēzi, masas spektroskopiju, cirkulāro dihroismu).
Analītiskās metodes
| Analīze |
Metodes |
| Aminoskābju oksidēšana |
LC-MS, apgrieztās fāzes augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfija (RP-HPLC) vai hidrofobās mijiedarbības hromatogrāfija augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfija (HIC-HPLC) un masas spektrometrija |
Analītiskās procedūras
1. Parauga sagatavošana
2. LC-MS
3. Datu analīze
Triptofāna (Trp) atlikumi ir īpaši pakļauti oksidācijai, jo aromātiskajam indolam ir augsta reaktivitāte ar reaktīvām skābekļa sugām. Trp oksidēšanai ir nepieciešama zināma Trp atlieku iedarbība, kas parasti tiek aprakti proteīna trīsdimensiju struktūrā.
Tomēr, kad Trp atlikumi tiek oksidēti, tie var pārveidoties par dažādiem produktiem, kuru īpašības ļoti atšķiras no sākotnējā Trp. Visizplatītākais Trp oksidācijas ceļš ietver N-formilkinurenīna veidošanos (masu starpība: +32).
Vēl viena parasti oksidēta aminoskābe ir metionīns. Met atlikuma sēra atoms var pieņemt vai nu vienu, vai divus skābekļa atomus, kas izraisa attiecīgi sulfoksīda (masu starpība: +16) vai sulfona (masu atšķirība: +32) veidošanos. Šī modifikācija ir salīdzinoši izplatīta, jo parasti ir augsta Met iedarbība uz virsmu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
