Process |
Izvēles pakalpojums |
Informācija par pakalpojumu |
Piegādes periods (diena) |
cirRNS sekvences dizains un optimizācija |
Kodēšanas secību projektēšana un optimizēšana |
CDS kodona optimizācija |
1 |
Nekodēšanas secību projektēšana un optimizēšana |
Intronu un eksonu secība, homologās rokas un starplikas dizains un optimizācija |
1-2 |
Apļveida plazmīdu sagatavošana |
Gēnu sintēze |
Gēnu sintēze (trešās puses) |
7-10 |
Plazmīdu pastiprināšana |
Plazmīdu pastiprināšana |
2 |
Plazmīdu ekstrakcija |
Linearizētu plazmīdu preparāts |
Plazmīdu linearizācija un attīrīšana |
Plazmīdu linearizācija |
1 |
Linearizācijas DNS attīrīšana |
In vitro transkripcija un ciklizācija |
In vitro transkripcija un ciklizācija |
In vitro transkripcijas un ciklizācijas reakcijas |
1-2 |
RNāzes R gremošana |
Optimizācija — pēc izvēles |
Reakcijas sastāvs, laika optimizācija |
2-5 |
cirRNS attīrīšana |
Tradicionālā attīrīšanas metode |
Litija hlorīda nokrišņi |
1 |
Magnētisko lodīšu attīrīšana |
1 |
Ļoti tīra cirRNS attīrīšana |
Preparatīvā augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfija (HPLC) |
1-2 |
Bufera apmaiņa |
Ultrafiltrācija |
1 |
cirRNS liofilizācija |
Parauga pildīšana |
Pildīšana |
2-3 |
Liofilizācija |
Iepriekšēja sasaldēšana |
Primārā žāvēšana (sublimācija) |
Sekundārā žāvēšana (desorbcija) |
cirRNS-LNP iekapsulēšana |
LNP iekapsulēšana |
Materiālu un šķidrumu pirmapstrāde |
2 |
Mikrofluidisko ierīču sajaukšana |
Bufera apmaiņa |
Tangenciālās plūsmas filtrēšana |
1 |
sterilizēts |
Filtrācija |
Plazmīdu DNS kvalitātes kontrole |
Koncentrācija/tīrība |
Ultravioletā (UV) spektrofotometrija |
1-2 |
Plazmīdu konformācija |
Agarozes gēla elektroforēze (AGE) |
Kapilārā elektroforēze (CE) — pēc izvēles |
Plazmīdu identificēšana |
Restrikcijas enzīmu identifikācija/VECUMS |
CirRNS kvalitātes kontrole |
Koncentrācija/tīrība |
Ultravioletā (UV) spektrofotometrija |
- |
Tīrība |
Agarozes gēla elektroforēze (AGE)/E-gel |
0.5 |
HPLC nav obligāta |
1 |
CirRNS-LNP kvalitātes kontrole |
Iekapsulēšanas efektivitāte |
RiboGreen metode |
1 |
Daļiņu lielums |
Dinamiskā gaismas izkliede (DLS) |
1 |
Polidispersitātes indekss |
Dinamiskā gaismas izkliede (DLS) |
1 |
Zeta potenciāls |
Dinamiskā gaismas izkliede (DLS) |
1 |
Uz šūnām balstīts potences tests |
Šūnu transfekcija |
Šūnu apšuvums, šūnu transfekcija |
4 |
Mērķa proteīna noteikšana |
Fluorescences novērošana, Western Blot/ELISA |
1-3 |