In vitro ciklizācijas un RNase R bagātinājuma produktiem nepieciešams tālāk izņemt no in vitro transkripcijas (IVT), ieskaitot nesavērtos ciklizācijas reakcijas substrātus, reakcijas pusesproduktus un sadurtu RNA.
Yaohai Bio-Pharma ir izstrādājuši pilnveidotos LiCl nomocīšanas, magnētiskā slāpekļa tīrīšanas un pašizstrādātas tīrīšanas risinājumus, lai efektīvi izņemtu dažādas siltumainības un gatavotu augsti tīru circRNA.
Tīrīšanas risinājums mazām circRNA daudzumam, kas paredzēts šūnu transfekcijai un kā daļa no dzīvnieku eksperimentiem.
Tīrīšanas risinājums mazām circRNA daudzumam, kas paredzēts šūnu transfekcijai un kā daļa no dzīvnieku eksperimentiem.
Lietojuma scenāriji ar augstāku kvalitāti;
Stabils un masveida ražošanai piemērots tīrīšanas process, lai atbilstu GMP ražošanas prasībām.
Procesus | Izvēles pakalpojumi | Pakalpojumu detaļas | Piegādes periods (dienās) | Sniedzamie rezultāti |
circRNA purifikācija | Konvencionālais tīrīšanas risinājums | Lietva hlorīda izkristalizēšanās | 1 | circRNA vielas preparāts |
Magnētiskā zaru tīrīšana | ||||
Īpaši tīrs circRNA tīrīšanas process | Hromatografija ar iepriekšējo augstas veiktspējas likvidu (HPLC) | 1-2 | ||
Bufera maiņa | Ultrafiltrācija | 1 | ||
circRNA kvalitātes kontrole | Koncentrācija\/tīrīšana | Ultravioletā (UV) spektrofotometrija | 0.5 | TESTA ZIŅOSLĒGIS |
Tīrums | Agarose gelas elektroforeze (AGE)/E-Gel | |||
HPLC-neobligāti | 1 |
Var sasniegt lietas pielietojuma scenārijus.
circRNA ar tīrību vairāk nekā 90%;
Caurs strektu RNāzu kontroli eksperimenta vidē un patēriņa līdzekļos tiek efektīvi novērsti RNA degradācijas process.
Yaohai Bio-Pharma ir izveidojusi pilnībā attīstītu circRNA tīrīšanas risinājumu, kas var efektīvi noņemt dažādus procesā saistītus piesārņojumus.
Ar konvencionālo risinājumu tīrītie cirkulārie RNA produkti joprojām skaidri satur sadurtu RNA un intronu sajaukumu.
Pēc Yaohai Bio-Pharma izstrādātā risinājuma tiek veiksmīgi noņemti dažādi lineārie RNA piesārņojumi, piemēram, sadurtie RNA un introni.
circRNA izpausmes apstiprinājums
Izmantojot konvencionālu lipīdzi, notīrītais eGFP circRNA tiek transficēts 293T šūnās, un pēc 24 stundām tiek novērots fluorescences signāls, kas pēc 48 stundām turpinās stiprināties. Fluorescences signāls joprojām var tikt noteicis 7. un 14. dienā pēc transficēšanas.