Iekapsulēšanas pamatā ir piegādes sistēmas projektēšana un izstrāde. Labi izstrādāta piegādes sistēma ļauj cirRNS molekulām iekļūt organismā bez RNS enzīmu noārdīšanas, un pēc tam tās efektīvi nogādā mērķa vietā, šķērso šūnu membrānu un izdalās intracelulāri.
Lipīdu nanodaļiņas (LNP) ir labākā pieejamā piegādes sistēma ar priekšrocībām iekapsulēšanā, in vivo ekspresijā un in vivo drošībā salīdzinājumā ar citām piegādes sistēmām. LNP ar nukleīnskābju fragmentiem viegli norij šūnās un veido intracelulārus ķermeņus. Iekļūstot šūnā, intracelulārā ķermeņa skābā vide protonē un pozitīvi uzlādē jonizētā lipīda galvu, tādējādi saplūstot ar intracelulārā ķermeņa iekšējo membrānu un izdalot mērķa nukleīnskābi šūnā darbībai.
Yaohai Bio-Pharma cirRNS pakalpojums turpina uzlaboties un var nodrošināt cirRNS-LNP iekapsulēšanas pakalpojumu, lai optimizētu attiecīgos kritiskos procesa parametrus un uzlabotu cirRNS zāļu ražošanas konsekvenci un reproducējamību.
Process | Informācija par pakalpojumu | Piegādes periods (diena) | Piegādes |
cirRNS-LNP iekapsulēšana | Materiālu un šķidrumu pirmapstrāde | 2 | cirRNS-LNP zāļu produkts (DP) |
Mikrofluidisko ierīču sajaukšana | |||
Tangenciālās plūsmas filtrēšana | 1 | ||
Sterilizējoša filtrēšana | |||
cirRNS-LNP kvalitātes kontrole | Iekapsulēšanas efektivitāte | 1 | Testa ziņojums |
Daļiņu izmērs un polidispersitātes indekss | |||
Zeta potenciāls |
Ātra sintēze, augsta pētniecības un attīstības efektivitāte un iepriekš optimizēti risinājumi;
Iekapsulēšanas attiecība var sasniegt vairāk nekā 90%;
Lipīdu nanodaļiņu izmēru var kontrolēt, mainot šķidruma ievadīšanas ātrumu un attiecību;
cirRNS-LNP produkti tiek apstiprināti ar in vitro šūnu ekspresiju un var efektīvi ekspresēt mērķa proteīnu.
Tiek sagatavoti LNP-eGFP cirRNS paraugi, un dažādās to devas (1 ug, 2 ug un 4 ug) tiek tieši transfekētas 293T šūnās, lai pārbaudītu, vai tās var ekspresēt mērķa proteīnu. Pēc 48 h transfekcijas var novērot skaidru fluorescējošu signālu un fluorescences intensitātes devas palielināšanas efektu.
Lipo-circ_eGFP, kas sastāv no liposomām un neiekapsulētas eGFP cirRNS, tiek ņemts par kontroli.