Par mazdaudzīgu mRNA ražošanu in vitro transkripcija (IVT) ir efektīvāka un izstrādātāka metode. IVT reakcijā kā šablonam tiek izmantots lineārais plazmid-DNA ar T7 promotoru, un mRNA sintēze notiek, izmantojot nukleozīdu trifosfātus (NTPs) par substrātiem kopā ar T7 RNA polimerāzi.
Nukleotīdu modifikācija ir pārsteidzošs sasniegums mRNA izpētē, jo neatmodificētas mRNA molekulas tiek pazīmtas kā īntracelulāras RNA detektoru atpazīstamas, lai aktivizētu dabīgo imunitāti. Ņemot vērā mRNA dzīvorganismā esošo imunitātes un tulkotāja efektivitāti, IVT procesā parasti tiek izmantotas dažādas modificētās NTPs, un parastie modificētie nukleotīdi ir psiļoūdele (Ψ), N1-metils-pseudoūdele (N1Ψ) un 5-metilcitoze (5mC).
In Vitro transkripcijas procesa mRNA
In vitro transkripcijas (IVT) reakcijas diagramma
Pakalpojumu sīkāki dati
Izvēles pakalpojumi |
Pakalpojumu detaļas |
Nodrošināšanas Periods (darbdiena) |
In vitro transkripcija (IVT) |
IVT, In vitro transkripcija |
1 |
| Nukleotīdu modifikācijas (Ψ/N1Ψ/5mC utt.) |
| Dauda veidojuma noņemšana (DNase I) |
IVT stundu optimizācija - neobligāti |
IVT reakcijas komponentu dizains un optimizācija |
2-5 |
Mūsu iespējas
- Dažādas nukleotīdu modifikācijas stratēģijas
Uzsākstiet mRNA stabilitāti un proteīna izpausmi dzīvā organismā.
- Stiprs testu projektēšanas un optimizācijas process
var sasniegt mRNA fragmenta sagatavošanu līdz 10 kb.
Palielinot IVT reakcijas apstākļus, transkripcijas ātrums sasniedz līdz 1:200.
Sieviešu kontrolēta RNase caur eksperimenta vidi un patēriņlīdzekļiem var efektīvi novērst mRNA degradāciju.
Studija par praksi
Pašreizējais IVT reakcijas sistēmas optimizācijas līmenis galvenokārt ir paredzēts sintētiskajai sistēmai ar garumu aptuveni 100 nt, nevis jebkuram garumam mRNA. Jo garāks ir mRNA secības garums, jo grūtāk tas ir transkribēt un jo vairāk tas ir nobriedis degradācijai.
Lai sagatavotu pielāgotas mRNA sekvences garumā apmēram 10 kb, Yaohai Bio-Pharma veiksmīgi ir gatavojuši augstas kvalitātes provetus ar augstu transkripcijas attiecību 1:135 un ieguvuši 135 μg sākotnēji tīrītas mRNA produkta pēc tam, kad 1 μg lineārais plazmids bija transkribēts ārpus dzīv organismā caur striktu eksperimenta plānošanu, nepārtrauktu reakciju optimizāciju un RNase kontroli.
mRNA identifikācija (agarose elektrofoze)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
