Pielāgota saRNS sintēze
Pašpastiprinošā mRNS (saRNS), kas pazīstama arī kā replikona RNS, kodē in vitro transkripcijas (IVT) mRNS sekvences un vīrusu replikāzes gēnus, kas iegūti no alfavīrusa vai flavivīrusiem. Vīrusu replikāzes gēni ļauj pašpastiprināties mRNS, kā rezultātā palielinās proteīna ekspresija un minimālā nepieciešamā RNS deva, salīdzinot ar neamplificējošām mRNS. Vēl viens aspekts ir tas, ka saRNS ir salīdzinoši liela molekula (vairāk nekā 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma ir izveidojis mRNS sintēzes tehnoloģiju komplektu, lai nodrošinātu nepastiprinošu mRNS un pašpastiprinošu mRNS (1000 nt ~ 14000 nt), piemēram, sekvences izstrādi un optimizāciju, IVT, attīrīšanu, liofilizāciju un lipīdu nanodaļiņu (LNP) iekapsulēšanu. . Visi produkti tiek izlaisti saskaņā ar stingriem kvalitātes kontroles standartiem.
1. att. IVT mRNS strukturālās iezīmes: parastā, cirkulārā un pašpastiprinošā mRNS.
Pašpastiprinošās mRNS secības iezīmes
Pašpastiprinošā RNS satur četrus nestrukturālus proteīnus (apzīmēti kā nsP1, nsP2, nsP3 un nsP4), kas iegūti no alfavīrusiem, Venecuēlas zirgu encefalīta vīrusa (VEEV). Starp tiem nsP1 uzrāda divkāršas enzīmu aktivitātes, proti, GTāze un N7MTase, turpretim nsP2 piemīt RTPāzes aktivitāte, kas ir būtiska IVT mRNS ierobežošanai, lai radītu Cap 0 struktūru. Turklāt nsP2 kalpo kā proteāze un helikāze, atvieglojot visa nsP kompleksa sarežģītu apstrādi. Precīza nsP3 funkcija joprojām ir nenotverama, tomēr tā iesaistās mijiedarbībā ar dažādiem saimniekšūnu proteīniem, tādējādi veicinot saimnieka izraisītās pretvīrusu atbildes reakcijas vājināšanos.
Alfavīrusa subgenomiskā promotora (SGP) reģions atrodas pirms interesējošā gēna (GOI). SGP elements atvieglo GOI transkripcijas uzsākšanu, apejot vīrusa nsP proteīnus kodējošo secību nolasīšanu.
2. att. Yaohai Bio-Pharma RNASci platformas eGFP saRNS sintēze un šūnu testi.
Pielāgoti saRNS risinājumi
SaRNS sintēzes protokols ir līdzīgs mRNS: Pielāgota mRNS sintēze
- Secības dizains
- Plazmīdu šablonu sagatavošana
- in vitro transkripcija (IVT)
- mRNS enzīmu ierobežošana
- mRNS līdztranskripcijas ierobežošana
- mRNS attīrīšana
- mRNS liofilizācija
- LNP iekapsulēšana
- Analīze un testēšana
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
