Saskaņā ar centrālo dogmu, messenger RNS (mRNS) ir tilts ģenētiskā materiāla pārnešanai no DNS uz olbaltumvielām.
mRNS spēlē bioloģisku lomu, kodē proteīnus in vivo, un nobriedušā mRNS eikariotu organismos sastāv no piecām sastāvdaļām: 5' vāciņa (vāciņa struktūra), 5' UTR (nekodējošais reģions), ORF (atvērtais lasīšanas rāmis), 3' UTR. , un 3' poliA aste (poliadenilāta aste).
Process | Izvēles pakalpojums | Informācija par pakalpojumu | Piegādes periods (diena) |
mRNS sekvences projektēšana un optimizācija | Kodēšanas secību projektēšana un optimizācija |
CDS secības izlīdzināšana CDS kodona optimizācija |
1 |
Nekodējošo secību projektēšana un optimizācija |
5' UTR sekvences projektēšana un optimizācija 3' UTR sekvences projektēšana un optimizācija polyA secību projektēšana un optimizācija |
1-2 |
5' UTR/3' UTR |
|
3' PolyA Tail |
|
mRNS komponenti | Bioloģiskās funkcijas | Optimizācijas stratēģijas |
5' Cap | Aizsargājiet mRNS no eksonukleāžu izraisītas degradācijas un rīkojieties saskaņoti ar poliA asti 3' galā, poliA saistošo proteīnu un translācijas iniciācijas faktora proteīnu, lai uzsāktu proteīna translāciju. | Dabiskā Cap1 struktūra izvairās no modeļa atpazīšanas receptoriem un tādējādi samazina dabisko imūnreakciju, ko var panākt ar vienpakāpes līdztranskripcijas ierobežošanu vai divpakāpju enzīmu ierobežošanu [sīkāku informāciju skatiet sadaļā mRNS enzīmu ierobežošana un līdztranskripcijas ierobežošana]. |
5' UTR | 5' UTR var atpazīt ar ribosomām, regulēt mRNS translāciju un ietekmēt mRNS stabilitāti. | Satur Kozaka sekvences bez ļoti stabilas sekundārās struktūras. In vitro transkripcijas (IVT) mRNS, piemēram, α-globīnam un β-globīnam, priekšroka tiek dota ļoti izteiktu gēnu dabiskajiem UTR. |
CDS | Proteīnus kodējošie reģioni un antigēnu, antivielu vai citu funkcionālu proteīnu kodēšanas sekvences. | Kodonu optimizācija paaugstina translācijas līmeni, atzīmējot, ka dažiem neoptimāliem kodoniem var būt nozīme olbaltumvielu locīšanas procesā. |
3' UTR | Regulē mRNS translāciju un stabilitāti. | Augsti izteiktu gēnu dabiskajiem UTR ir priekšroka IVT mRNS, piemēram, α-globīnam un β-globīnam. |
3' poliA aste | Regulē olbaltumvielu ekspresiju un aizsargā vāciņu struktūru no degradācijas. | Nepieciešams atbilstošs garums (100-150 bp); kodē poliA asti transkripcijas šablona plazmidā, nodrošina precīzāku poliA astes garumu. |
Vairāki augsti izteiktu dabisko un modificēto UTR bibliotēku avoti; nobriedusi UTR modifikācijas stratēģija;
Sadarbojieties ar profesionālu AI algoritmu komandu, lai pabeigtu kodonu optimizāciju.
Pievienojiet poliA sekvences atbilstoši DNS veidnēm, lai precīzāk kontrolētu mRNS garumu.
Panākt efektīvu mRNS ekspresiju ar zemu imunogenitāti.
Divu ziņotāju mRNS secības dizains: mCherry-eGFP mRNS
Yaohai Bio-Pharma mRNS pakalpojums turpina uzlaboties, izstrādājot un optimizējot dubultā reportiera gēnu tandēma secību, kas nodrošina divu gēnu līdzekspresiju.
Izmantojot parasto transfekcijas reaģentu, dubultā gēna tandēma secība mCherry-eGFP mRNS tiek transficēta 293T šūnās, un pēc 48 stundām tiek atklāti divi mCherry (sarkanā) un uzlabotā zaļā fluorescējošā proteīna (eGFP) fluorescējošie signāli ar vienlaicīgu ekspresiju, un stacked. grafiks ir iezīmēts dzeltenā krāsā.
mCherry-eGFP mRNS ekspresija 293T šūnā