Salīdzinot ar divpakāpju enzīmu ierobežošanu, vienpakāpes koptranskripcijas ierobežošanas metode var ievērojami samazināt procesa plūsmu. Metode ir orientēta uz rezultātu un ietver vāciņu analogu pievienošanu in vitro transkripcijas (IVT) reakcijai. Vāciņa analogus var ieviest transkripcijas sākumā, un mRNS ar vāciņa struktūru var iegūt pēc transkripcijas pabeigšanas. Pašreizējie trešās paaudzes vāciņu analogi var izvairīties no reversās ierobežošanas un tieši pievienot 1. vāciņa struktūru transkripcijas produktam.
Lai ņemtu vērā mRNS in vivo imunogenitāti un translācijas efektivitāti, IVT process bieži izmanto noteiktu veidu modificētus NTP, un parastie modificētie nukleotīdi ir pseidouridīns (Ψ), N1-metil-pseidouridīns (N1Ψ) un 5-metilcitozīns (5 mC). .
Attēls: mRNS kotranskripcijas un ierobežošanas reakcijas diagramma
Informācija par pakalpojumu
Serviss | Informācija par pakalpojumu | Piegādes periods (darba diena) |
Līdztranskripcijas ierobežojums | In vitro transkripcijas reakcija (Clean Cap analogs) | 1-2 |
| Nukleotīdu modifikācijas (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNS veidnes noņemšana (DNāze I) |
IVT nosacījumu optimizācija - pēc izvēles | Reakcijas komponentu projektēšana un optimizācija | 3-7 |
Mūsu funkcijas
- Daudzveidīgas nukleotīdu modifikācijas stratēģijas
Vairākas izvēles nukleotīdu modifikācijas stratēģijas var uzlabot olbaltumvielu ekspresiju.
- Optimizēta reakcijas sistēma
Sasniedziet augstu transkripcijas koeficientu un augstu ierobežošanas efektivitāti.
- Stabils ierobežošanas process
Sasniedziet ierobežojumu līmeni, kas pārsniedz 95%.
Efektīvi novērsiet mRNS degradāciju, stingri kontrolējot RNāzi eksperimentālajā vidē un palīgmateriālos.
Gadījuma izpēte
Yaohai Bio-Pharma ir izveidojusi nobriedušu koptranskripcijas ierobežošanas procesa platformu, izmantojot tīrus vāciņu analogus, lai tieši pievienotu Cap1 struktūru, vienlaikus izvairoties no apgrieztās ierobežošanas. Pēc standartizētas paraugu pirmapstrādes un kapilārās elektroforēzes (CE) noteikšanas uzlabotā zaļā fluorescējošā proteīna (eGFP) mRNS ierobežošanas ātrums var sasniegt vairāk nekā 95%.
eGFP mRNS ierobežošanas efektivitāte vairāk nekā 95%
eGFP mRNS un mCherry mRNS, kas sagatavotas ar ko-transkripcijas ierobežošanu, tiek transfekētas attiecīgi 293T šūnās, un pēc 48 stundām tiek novērots spēcīgs fluorescējošais signāls, kas liecina, ka mRNS tiek efektīvi ekspresēta 293T šūnās.
eGFP mRNS un mCherry mRNS ekspresija 293T šūnā
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
