5'-gala kapēšana ir obligāta mRNA modifikācija. mRNA ar kapstruktūrām, īpaši Cap1 struktūrām, palīdz izvairīties no dzimuma imūnreakcijām dzīvorganismā, kas rezultē efektīvā proteinu sintēzē.
Enzimālais kapēšanas process (divu soļu metode) ir tradicionālais mRNA kapēšanas veids, līdzīgs kapēšanas procesam eukariotiskos organismos. Sērijas enzīmu darbā 7-metilguanīns (m7G) tiek saistīts ar mRNA 5'-galu caur 5'-5' trifosfātu saišu un pēc tam uztver metilācijas modifikāciju, lai veido Cap1 struktūru (m7GpppN).
Diatrama par dabīgas kapstruktūras veidošanu
Enzimālā kapēšanas reakcijas plūsma ir šāda:
Lineārēta plazmīda DNS tiek izmantota kā šablonam in vitro transkripcijai (IVT) T7 polimerēzes uzskaites klātienes, un pēc vienstājīgas tīrīšanas, izmantojot vakcinijas apvilkšanas ēnziimu un 2'-O-metilpārnesēju, tiek veidots mRNA ar 5' galu ar kapu struktūru.
Pakalpojumu sīkāki dati
Izvēles pakalpojumi |
Pakalpojumu detaļas |
Piegādes periods (dienās) |
mRNA enzimālais apvienošana |
Ēnziģiskā apvilkšanas reakcija |
1 |
Apvilkšanas reakcijas optimizācija - neobligāti |
Reakcijas sastāvdaļu dizains un optimizācija |
3~7 |
Mūsu iespējas
- Apvilkšanas reakcijas sastāvdaļu dizains un optimizācija
Apvilkšanas reakcijas sastāvdaļa ir optimizēta, un mRNA transkripta ražošana ir lielā mērā palielināta.
- In vitro izteiksmes pārbaude
Kappētā mRNA tiek transficēta 293T līdzekļos, un var novērot marķierproteīna izpausmi.
Caurspīdīgas kontroles par RNazēm eksperimenta vides un patēriņlīdzekļu ziņā efektīvi novērš mRNA degradāciju.
Studija par praksi
Yaohai Bio-Pharma mRNA platforma ir izveidojusi ideālu kappēšanas reakcijas procesu.
Attiecībā uz eGFP mRNA, kas iegūta enzimatiski ar kappēšanu, pēc 24 stundām pēc 293T līdzekļu transficēšanas var redzēt augstu līmeni eGFP fluorescences signāla (zaļa fluorescences), kas apstiprināts ar Western Blot (WB) metodi, demonstrējot, ka marķierproteīns – uzlabotais zaļais fluorescenču proteīns (eGFP) – var tikt efektīvi izpausts in vitro.
Enzimatiski kappētā eGFP mRNA izpausme 293T līdzekļos
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
