Attiecībā uz RNS prekursoru sērijveida sagatavošanu parasti izmantotā metode ir in vitro transkripcija (IVT). IVT reakcijā kā veidni izmanto linearizētu plazmīdas DNS, kas satur T7 promotoru, un sintezē RNS prekursoru ar nukleozīdu trifosfātiem (NTP) kā substrātu T7 RNS polimerāzes klātbūtnē.
In vitro ciklizācijas metodes ietver ķīmisko ligāciju, fermentatīvo ligāciju un permutētā intron-eksona (PIE) metodi. Īsāku RNS ciklizācijai ir piemērota ķīmiskā ligācija un fermentatīvā ligācija. Ja fragments ir lielāks par 100 nt, ciklizācijas ātrums ievērojami samazināsies. Turpretim nukleāzes metode, kuras pamatā ir PIE sistēma, var panākt 8 kb sekvenču ciklizāciju.
Guanozīna trifosfāta (GTP) katalīzes rezultātā PIE struktūrā notiek ekstraintronu sekvenču ciklizācija. Apvienojumā ar saprātīgu stratēģiju, lai palielinātu ciklizācijas ātrumu, Yaohai Bio-Pharma var sasniegt ciklizāciju līdz pat 4 kb sekvencēm ar ciklizācijas efektivitāti, kas pārsniedz 80%.
RNS ciklizācijas reakcija in vitro notiek šādi:
RNS prekursors tiek sintezēts ar in vitro transkripciju, un PIE komponents pabeidz pašsavienošanos GTP katalīzes laikā, veidojot cirRNS.
Informācija par pakalpojumiem
| Process |
Informācija par pakalpojumu |
Piegādes periods (darba diena) |
| In vitro transkripcija un cirkulācija |
Reakcijas sistēmas apstiprinājums |
1-2 |
| In vitro transkripcijas un ciklizācijas reakcijas |
| RNāzes R gremošana |
| Reakcijas optimizācija |
Reakcijas sastāvs, laika optimizācija |
2-5 |
Mūsu funkcijas
- Stingrs testa dizains un optimizācija
Var sasniegt līdz 4 kb RNS ciklizāciju.
- Augsta ciklizācijas efektivitāte
Ciklizēšanas ātrumu, kas pārsniedz 80%, var sasniegt, izmantojot racionālu secības optimizācijas stratēģiju.
Stingri kontrolējot RNāzes eksperimentālajā vidē un palīgmateriālos, RNS degradācija tiek efektīvi novērsta.
Gadījuma izpēte
CirRNS in vitro ciklizācija un bagātināšana
Pamatojoties uz PIE sistēmu, Yaohai Bio-Pharma ir optimizējis cirRNS secību ar ciklizācijas ātrumu, kas pārsniedz 80%, izmantojot agarozes gēla elektroforēzi (AGE). Izmantojot RNase R, lai bagātinātu cirRNS, E-gēla elektroforēzes rezultāti liecina, ka lineārais RNS prekursors tiek sagremots, un pēc turpmākas attīrīšanas lielāko daļu cirRNS var noņemt. Attīrīšanas risinājumu izstrādājis uzņēmums Yaohai Bio-Pharma.
In vitro cirkulācija un cirRNS bagātināšana
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
