Par RNA prekursoru partiju sagatavošanu bieži izmanto metodi, kas saucās par in vitro transkripciju (IVT). IVT reakcijā kā šablonam tiek izmantots lineārais plazmīdas DNA, kas satur T7 promotoru, un sintetizē RNA prekursoru, izmantojot nukleozīdu trifosfātus (NTP) kā substraetu kopā ar T7 RNA polimerāzi.
In vitro ciklizācijas metodes ietver hīmisku savienošanu, enzimisko savienošanu un permūtēto intronu-ekzonu (PIE) metodi. Hīmiskā savienošana un enzimiskā savienošana ir piemērotas īsāku RNA molekulu ciklizācijai. Kad fragmenta lielums pārsniedz 100 nt, ciklizācijas tempers drastiski samazinās. Tiesa, nukleaza metode, balstoties uz PIE sistēmu, var sasniegt 8 kb sekvenču ciklizāciju.
Zem guanīna trifosfāta (GTP) katalīza PIE struktūra veic ciklizāciju virknēm, kas atrodas ārpus introniem. Savienojot ar pareizu stratēģiju, lai palielinātu ciklizācijas tempu, Yaohai Bio-Pharma var sasniegt līdz 4 kb garu sekvenču ciklizāciju, ar ciklizācijas efektivitāti vairāk nekā 80%.
RNA in vitro ciklizācijas reakcija norisinās šādi:
RNA priekšlīdzis tiek sintetizēts in vitro transkripcijas palīdzībā, un PIE komponents, zem GTP katalīza, izpilda savu splicingu, lai izveidotu circRNA.
Pakalpojumu sīkāki dati
| Procesus |
Pakalpojumu detaļas |
Nodrošināšanas Periods (darbdiena) |
| In vitro transkripcija un cirkulācija |
Reakcijas sistēmas apstiprināšana |
1-2 |
| In vitro transkripcijas un ciklizācijas reakcijas |
| RNase R digestija |
| Reakcijas optimizācija |
Reakcijas sastāva, laika optimizācija |
2-5 |
Mūsu iespējas
- Stiprs testu projektēšanas un optimizācijas process
Var sasniegt līdz 4 kb RNA ciklizāciju.
- Augsta ciklizācijas efektivitāte
Ciklizācijas tempu vairāk nekā 80% var sasniegt, izmantojot saprātīgu secību optimizācijas stratēģiju.
Caurs strektu RNāzu kontroli eksperimenta vidē un patēriņa līdzekļos tiek efektīvi novērsti RNA degradācijas process.
Studija par praksi
Ciklizācija un apgaismojums circRNA in vitro
Balstoties uz PIE sistēmu, Yaohai Bio-Pharma ir optimizējusi circRNA secību, ciklizācijas līmenis sasniedz vairāk nekā 80% agaroselektrofozę (AGE). Lietojot RNaze R, lai apgādinātu circRNA, E-gelā elektrofozę rezultāti parāda, ka lineārais RNA priekšlūgs tiek dizestēts, un pēc tālākas purifikācijas var noņemt lielu daļu no neskartajiem circRNA. Purifikācijas risinājums ir izstrādāts paši Yaohai Bio-Pharma.
Ciklizācija un apgaismojums circRNA in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
