Glutamīna un asparagīna sānu ķēžu deamidēšana ir izplatīta modifikācija, ņemot vērā ietekmi uz proteīnu biofarmaceitisko līdzekļu īpašībām. Deamidācija var notikt glutamīna atlikumos, bet parasti daudz mazākā ātrumā. Deamidācijas ātrumu ietekmē temperatūra, pH, vietējā proteīna struktūra un blakus esošās aminoacila atliekas.
Yaohai BioPharma piedāvā aminoskābju deamidācijas testēšanas pakalpojumu, kas ļauj noteikt aminoskābju deamidāciju, izmantojot šķidruma hromatogrāfijas-masas spektrometriju (LC-MS).
Mēs esam bijuši iesaistīti dažādu lielu molekulu, tostarp rekombinanto apakšvienību vakcīnu, nanoķermeņu/VHH/ viena domēna antivielu (sdAb), antivielu fragmentu, hormonu/peptīdu, citokīnu, augšanas faktoru (CF), enzīmu, strukturālajā raksturojumā. utt.
Normatīvās prasības attiecībā uz aminoskābju deamidāciju
Saskaņā ar ICH Q6B vadlīnijām deamidētās formas var noteikt un raksturot ar hromatogrāfiskām, elektroforēzes un/vai citām atbilstošām analītiskām metodēm.
Analītiskās metodes
| Analīze |
Metodes |
| Deamidācija |
Šķidruma hromatogrāfijas masas spektrometrija (LC-MS) |
Procedūras
piemēram, asparagīnskābes deamidēšana
1. Fermentatīvā gremošana
2. LC-MS augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfijas (HPLC) apstākļos
3. Datu analīze
Asparagīna deamidācija notiek, izmantojot sukcinimīda starpproduktu (Suc), kas ir jutīgs pret racemizāciju un hidrolīzi, iegūstot četrus Asp izomērus, tostarp L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp un D-IsoAsp.
Teorētiski Gln deamidēšana varētu radīt četrus atbilstošus Glu izomērus, izmantojot procesu, kas līdzīgs Asn deamidācijai.
Augstas izšķirtspējas masas spektrometrija viegli identificē 1-Da masas atšķirību starp Asn / Gln saturošiem peptīdiem un to atbilstošajiem deamidētajiem kolēģiem Asp / Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
