N-glikozilācijas vietu aizpildījums ir fizioloģisks glykoproteīnu īpašums un galvenokārt ražo N-glikānus. Yaohai Bio-Pharma pakalpojums par N-glikozilācijas vietu aizpildījumu tiek veikts ar dažādu digestiju, atbrīvošanu, bagātināšanu un analīzi, izmantojot Šķiedras hromatogrāfiju-Elektrosprauga jonizācija Masu spektrometrija-Masu spektrometrija (LC-ESI-MS/MS).
Mēs esam iesaistīti dažādu lielo molekulu, tostarp Rekombinantu Subūnas vakcinu, Nanocorpusi/VHHs/Vienkāršo anticorpuss (sdAbs), Anticorpju fragmentu, Hormonu/Peptīdu, Citoķīnu, Augstas faktoru (GF), Enzīmu, Kolaģēnu utt. Proteīnu struktūras raksturošanā.
Regulatīvie prasības N-glikozilācijas vietu aizpildījumam
Pēc ICH Q6B norādes, „glikoproteīnu gadījumā tiek noteikts cukura sastāvs (neitrālie cukuri, aminocukuri un sialoāzidi). Turklāt tiek analizētas cukura virsmas struktūras, oligosaharīdu modelis (antenas profils) un polipeptīda virsmas glikozacilēšanas vieta(s) vislielākajā iespējamajā apmērā.”
Analītiskā metode
| Analīze |
Metodes |
| N-glikozilācijas vietu aizpildījuma līmenis |
LC-MS pēc deģlikozilāzes un proteāzu degļošanas |
Procedūras
1. Proteīnu degļošana, lai iegūtu mazus peptīda fragmentus.
2. N-glikānu atbrīvošana, izmantojot endoglikozidazu H vai PNGaze F. Endoglikozidaza H sadod saiti starp diviem GlcNAc šķiedrām N-saistīto glikānu vidū, savukārt PNGaze F ir gleikoamidaze, kas sadod saiti starp GlcNAc un Asn, atbrīvojot veselo cukura virsmu un pārvēršot Asn par Asp ar masas pieaugumu uz 1-Da.
3. N-glikopeptīdu koncentrēšana ar HILIC (hidrofilas interakcijas dzimumainais krājums)
4. N-saistīto glikozacilēšanas vietu aizņemtības analīze, izmantojot LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
