Augšupējās procesa attīstības nozīme
Augšupējais process (USP), kas pazīstams arī kā fermentācijas process, ir viena no sākotnējās bioapstrādes fāzēm. Mikrobu fermentācijas process ir ļoti svarīgs augsta blīvuma šūnu kultūrai un eksogēnu gēnu ekspresijai, kas tieši ietekmē bioloģisko ražu un izmaksas.
Bioloģisko līdzekļu izstrādes sākumposmā (pirmsklīniskajā vai 1/2 fāzē) galvenā uzmanība tiek pievērsta mērogojamu bezdzīvnieku procesu izstrādei ar vidēju ražu un visiem produktu kvalitātes standartiem.
Kamēr vēlīnā stadijā (3. fāze vai komerciāls), mēs koncentrēsimies uz ienesīgumu, robustumu, mērogojamību un reproducējamību, radot rentablu procesu. Darbības, kas risina šos jautājumus, ir procesa raksturošanas un procesa validācijas pētījumi. Tikmēr parasti tiek piemēroti kvalitātes pēc konstrukcijas (QbD) un eksperimentu izstrādes (DoE) rīki.
Atslēgvārdi: procesa izstrāde, optimizācija un validācija, fermentācijas process, mikrobu šūnu fermentācija, baktēriju fermentācija, rauga fermentācija, augsta blīvuma fermentācija, inženierijas celmu fermentācija
Pielietojums: Biofarmācijas rūpniecība, cilvēku medicīna, dzīvnieku medicīna, vakcīna, rekombinantās lielas molekulas bioloģiskās vielas, rekombinantās bioloģiskās vielas, bioloģiskais reaģents
Yaohai Bio-Pharma USP risinājumi
Izmantojot vairāk nekā 10 gadu mikrobu fermentācijas pieredzi, Yaohai Bio-Pharma ir zināšanas, kas palīdz atrisināt fermentācijas procesa problēmas. Mēs varam ātri izveidot augsta blīvuma fermentācijas stratēģijas Escherichia coli (E. coli) periplazmatiskā sekrēcija, intracelulārā šķīstošā vai iekļaušanas ķermeņa ekspresija un rauga ekstracelulārā vai intracelulārā ekspresija.
Mūsu pieejamie vispārīgie fermentācijas izstrādes pakalpojumi ietver:
- Fermentācijas procesa projektēšana veikta nelielā mērogā 7L padeves partijas režīmā
- Trīs partiju procesa validācija 7L fermentatoros
- Vidēja procesa apjoms līdz 30L/70L
Mēs varam elastīgi veikt vairāku parametru optimizāciju, lai sasniegtu vēlamo ražu vai proporciju, izmantojot vienreizējo faktoru (OTAF) vai eksperimentālo projektu (DoE).
Galvenie fermentācijas parametri ir uzskaitīti šādi:
Dzīvnieku nesaturošas fermentācijas vides kompozīcijas
Bez antibiotikām vai bez, inokulāta tilpums
Augšanas temperatūra, pH, izšķīdušā skābekļa (DO) līmenis
Padeves režīms (piemēram, padeves režīms)
Induktora koncentrācija (piemēram, IPTG, metanols), indukcijas punkts (šūnas mitrā masa/OD600),
Indukcijas temperatūra, indukcijas laiks
un tā joprojām
Informācija par pakalpojumu
| Pakalpojumi |
Procesa plūsma |
| Audzēšana kratīšanas kolbā (500 ml) |
Barotnes sagatavošana bez dzīvniekiem → Mikrobu sēklu kultivēšana → Kultivēšana kratītājā → Indukcija → Ražas novākšana |
| Audzēšana fermentētājā (7 l) |
Barotnes sagatavošana bez dzīvniekiem → Mikrobu sēklu kultivēšana → Augsta blīvuma šūnu fermentācija 7L bioreaktorā → Indukcija → Ražas novākšana |
| Olbaltumvielu/peptīdu kvalitātes kontrole |
Iepriekšēja apstrāde Intracelulārā šķīstošā ekspresija: mikrobu šūnu ievākšana un atkārtota suspensija → ultraskaņas sasmalcināšana → šūnu atlieku noņemšana → neapstrādāts ekstrakts Iekļaušanas ķermeņa ekspresija: mikrobu šūnu ievākšana un atkārtota suspensija → ultraskaņas sasmalcināšana → iekļaušanas ķermeņa sagatavošana → neapstrādāts ekstrakts Ārpusšūnu šķīstošā ekspresija: kultūras supernatanta savākšana → Koncentrācija un buferšķīdums apmaiņa → Neapstrādāts ekstrakts Kvalitātes analīze Neapstrādāts ekstrakts kā paraugs → Mērķa proteīna analīze ar SDS PAGE vai Western blot (WB) |
| Plazmīdu kvalitātes kontrole |
Priekšapstrāde un kvalitātes analīze Plazmīdu ekstrakcija → DNS analīze ar agarozes gēla elektroforēzi |
Gadījuma izpēte
Mūsu klients mums ir pasūtījis palielināt mērķa polipeptīdu hormona iznākumu no 8 g/l līdz 10 g/l.
Pamatojoties uz pilno faktoru dizainu un reakcijas virsmas dizainu DoE rīkos, mēs ātri atpazinām un optimizējām galvenos fermentācijas parametrus. Optimizētā augsta šūnu blīvuma fermentācijas procesā ekspresijas līmenis palielinājās līdz 10 g/l.
Mūsu pieredze
- Mēs esam strādājuši pie dažāda veida mikrobu saimniekiem, piemēram, E.coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink celms 1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) un Hansenula polymorpha (H. polymorpha).
- Mēs esam pieredzējuši ar E. coli periplazmatiskā sekrēcija, šķīstošā un iekļaušanas ķermeņa ekspresija, kā arī rauga intracelulārā vai ekstracelulārā ekspresija. Ieslēguma ķermeņa iznākums ir līdz 10 g/l, savukārt šķīstošo proteīnu iznākums svārstās no 0.5 līdz 15 g/l.
- Mēs esam bijuši iesaistīti dažādu lielu molekulu, tostarp rekombinanto apakšvienību vakcīnu, vīrusiem līdzīgo daļiņu (VLP), hormonu (insulīns, GLP-1, augšanas hormons), citokīnu (Interleikīns-2/IL-2, IL) izstrādē un ražošanā. -15, IL-21), augšanas faktori (EGF, FGF, NGF), nanoķermeņi/ viena domēna antivielas (sdAb), fermenti utt.
- Iekārta
7L*16 fermentācijas sistēma
Cedex Bio Analyzer, Bioprocesu analizators
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
