Az mRNS in vitro szintézise
Az mRNS fő komponensei az 5'-cap, 5'-UTR, nyitott leolvasási keret (ORF), 5'-UTR és 5'-poli A farok, amelyek nélkülözhetetlenek az mRNS működésének fenntartásához. A kutatók számos módszert alkalmaztak az mRNS-szekvenciák és -struktúrák azonosítására és optimalizálására.
Az mRNS szintézise in vitro transzkriptum (IVT) alapján történik lineáris DNS templátok, RNS polimerázok (T3, T7 vagy SP6), nem módosított vagy módosított nukleotidok, enzimek és megfelelő reagensek felhasználásával.
5' sapka módosítása
Az eukariocitákból származó érett mRNS szekvenciái 7-metilguanozin (m7G) sapkát mutatnak az 5' végén, ami javítja az mRNS stabilitását és transzlációs hatékonyságát. Két általános módszer létezik az mRNS in vitro befogására. Először is, az mRNS-t az in vitro átirattal együtt le lehet zárni az m7GpppG szerkezet cap analógjának (pl. CleanCap) hozzáadásával az IVT rendszerhez. Ez a ko-transzkripciós kupakolási módszer természetes 5' kapszulaszerkezetet biztosít, és közel 90-99%-ra növeli a kupakolás hatékonyságát. Másodszor, az mRNS-térképezés az in vitro transzkripciós reakciót követő enzimreakciók feltérképezésével is megvalósítható.
PolyA módosítás
A poli(A) farok in vivo meghosszabbítja az mRNS felezési idejét és javítja az mRNS transzlációs hatékonyságát. Az amplifikált poli(A) farok hossza 100-300 nukleotid legyen. Ezenkívül a módosított adenozin növeli a poli-A farok stabilitását a celluláris RNáz lebomlásával szemben. A poli-A-farok in vitro transzkripcióval inszertálható poli-A-t kódoló DNS-templát segítségével, ezáltal specifikus poli-A-szekvencia-hosszúságot eredményezve. A rekombináns poli A polimeráz enzimes poliadenilációval is használható mRNS transzkripció után.
Nukleotidok módosítása
A módosított nukleozidok két teljesen különböző módon gátolhatják a mintázatfelismerő receptorok (PRR) felismerését és/vagy aktiválását, és fokozhatják az mRNS vakcinák hatékonyságát. Bizonyos kémiailag módosított nukleozidok, köztük a pszeudouridin (ψ), 1-metilpszeudouridin (m1ψ), tiouridin (s4U) és 5-metilcitozin (m5C) hozzáadása megakadályozhatja a TLR7/8 és más veleszületett immunreceptorok aktiválódását, amelyek jelentősen csökkentik az immunogenitást. mRNS-ből.
mRNS Szállító Rendszer
Az mRNS működésének fenntartásához be kell jutnia a gazdaszervezet citoplazmájába, és specifikus antigéneket kell kifejeznie. Az egyik legnehezebb kihívás az mRNS-vakcinákkal és terápiákkal szemben az mRNS-nek a célsejtekbe történő, kellően magas transzlációs szinttel történő eljuttatásában rejlik, amihez nagyon specifikus és hatékony mRNS-bejuttató rendszerekre van szükség. Számos mRNS-bejuttató vektort fejlesztettek ki és alkalmaztak, beleértve a dendritikus sejteket (DC-ket), a protamint, a kationos polimereket és a kationos liposzómákat.
A kationos lipidek mRNS-sel és más preparátumokkal alkotott komplexei együttesen 80-200 nm méretű nanorészecskéket képezhetnek, amelyeket lipid nanorészecskéknek (LNP-k) neveznek. Mint az egyik legfejlettebb mRNS szállító rendszer, az LNP ionizálható kationos lipideket, természetes foszfolipideket, koleszterint és polietilénglikolt (PEG) tartalmaz. Számos, az Egyesült Államok Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hatósága által jóváhagyott RNS-vakcina és terápia (siRNS és mRNS) LNP-bejuttató rendszereken alapul.
A Yaohai Bio-Pharma egyablakos megoldást kínál az RNS-hez
Egyedi leszállítandó termékek
|
Fokozat
|
teljesítések
|
Leírás
|
Alkalmazási területek
|
|
nem GMP
|
Gyógyszer, mRNS
|
0.1-10 mg (mRNS)
|
Preklinikai kutatások, például sejttranszfekció, analitikai módszerfejlesztés, pre-stabilitási vizsgálatok, készítményfejlesztés
|
|
Gyógyszerkészítmény, LNP-mRNS
|
|
GMP, sterilitás
|
Gyógyszer, mRNS
|
10 mg-70 g
|
Új vizsgálati gyógyszer (IND), klinikai vizsgálati engedélyezés (CTA), klinikai vizsgálati ellátás, biológiai engedélykérelem (BLA), kereskedelmi kínálat
|
|
Gyógyszerkészítmény, LNP-mRNS
|
5000 injekciós üveg vagy előretöltött fecskendő/patron
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEM
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
