Synteza in vitro mRNA
Główne składniki mRNA to kap w 5’-położeniu, 5’-UTR, otwarty ramnik czytania (ORF), 5’-UTR i ogon poli-A w 5’, które są niezbędne do utrzymania funkcji mRNA. Badacze wykorzystali wiele metod do identyfikacji i optymalizacji sekwencji i struktur mRNA.
Synteza mRNA przeprowadzana jest na podstawie transkrypcji in vitro (IVT) przy użyciu liniowych szablonów DNA, polimeraz RNA (T3, T7 lub SP6), niezmodyfikowanych lub zmodyfikowanych nukleotydów, enzymów oraz odpowiednich reagentów.
modyfikacja kapu w 5’-położeniu
Sekwencje dojrzałego mRNA z eukariontu mają na 5' końcu kapę 7-metylogwanozynową (m7G), która poprawia stabilność mRNA i efektywność translacji. Istnieją dwie ogólne metody izolowania mRNA in vitro. Po pierwsze, mRNA może być zakapowane wraz z transkrypcją in vitro przez dodanie analogu kapy o strukturze m7GpppG (np. CleanCap) do systemu IVT. Ta metoda zakapowania ko-transkrypcyjnego zapewnia naturalną strukturę kapsy 5' i zwiększa efektywność zakapowania do prawie 90-99%. Po drugie, mapowanie mRNA można również wykonać za pomocą reakcji enzymowych po transkrypcji in vitro.
Modyfikacja PolyA
Ogon poly(A) przekształca również połowę życia mRNA w vivo i poprawia efektywność translacji mRNA. Długość wzmacnianego ogona poly(A) powinna wynosić 100-300 nukleotydów. Ponadto, zmodyfikowany adezyna zwiększa stabilność ogona poly A wobec degradacji przez komórkowe RNazy. Ogon poly A może być wstawiony za pomocą transkrypcji in vitro przy użyciu szablonu DNA kodującego poly A, co prowadzi do określonej długości sekwencji poly A. Może również zostać użyta rekombinowana polimeraza poly A, która enzymatycznie dodaje ogon poly A po transkrypcji mRNA.
Modyfikacja nukleotydów
Zmodyfikowane nukleozydy mogą inhibować rozpoznawanie i/lub aktywację receptorów rozpoznawania wzorców (PRR) oraz zwiększać efektywność szczepionek mRNA na dwa zupełnie różne sposoby. Dodanie niektórych chemicznie zmodyfikowanych nukleozydów, w tym pseudourydyny (ψ), 1-metylpseudourydyny (m1ψ), tiourydyny (s4U) i 5-metylcytosyny (m5C), może zapobiec aktywacji TLR7/8 i innych receptorów odporności innate, co znacząco obniża immunogeniczność mRNA.
system Dostarczania mRNA
Aby zachować funkcjonalność mRNA, musi on wejść do cytoplazmy gospodarza i wyrazić określone antygeny. Jednym z najtrudniejszych wyzwań stojących przed szczepionkami i lekami opartymi na mRNA jest dostarczenie mRNA do komórek docelowych z wystarczająco wysokimi poziomami translacji, co wymaga bardzo specyficznych i efektywnych systemów dostarczania mRNA. Zostało opracowanych i zastosowanych kilka wektorów dostarczania mRNA, w tym komórki dendrytyczne (DCs), protamina, katjonowe polimery oraz katjonowe liposomy.
Zespoły kationowych lipidów z mRNA i innymi przygotowaniami mogą tworzyć zbiorczo nanopartycuły o rozmiarach 80-200 nm, nazywane lipidowymi nanopartkami (LNP). Jako jedno z najbardziej zaawansowanych systemów dostarczania mRNA, LNP obejmuje jonizowalne kationowe lipidy, naturalne fosfolipidy, cholesterol i polietylen glykol (PEG). Kilka szczepionek RNA i terapii (siRNA i mRNA) zatwierdzonych przez Amerykańskie Biuro Żywności i Leków opiera się na systemach dostarczania LNP.
Yaohai Bio-Pharma Oferta Kompleksowego Rozwiązania dla RNA
|
Produkty RNA z katalogu
- Produkty mRNA z katalogu
- Katalog produktów saRNA
- Katalog produktów circRNA
|
Własna synteza RNA
- Własna synteza mRNA
- Niestandardowa synteza saRNA
- Niestandardowa synteza circRNA
|
usługi CDMO mRNA
- Rozwój procesu
- Produkcja GMP
- Sterylne wypełnianie i końcowe procedury
- Analiza i Testy
|
Dostosowane Wyniki
|
Stala
|
Dostarczane materiały
|
Specyfikacja
|
Zastosowania
|
|
nie-GMP
|
Substancja czynna, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Badania wstępne, takie jak transfekcja komórek, rozwijanie metod analitycznych, wstępne badania stabilności, opracowywanie formuły
|
|
Lekprodukt, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterylność
|
Substancja czynna, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Zgłoszenie nowego leku do badań klinicznych (IND), Zgoda na przeprowadzanie badań klinicznych (CTA), Zaopatrzenie w badania kliniczne, Wniosek o licencję biologiczną (BLA), Zaopatrzenie handlowe
|
|
Lekprodukt, LNP-mRNA
|
5000 fiol czy szprych z prewspomocą / kartridżami
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
