Znaczenie rozwoju procesów końcowych (DSP).
Cała brzeczka fermentacyjna zawiera docelowe białko lub plazmid, jak również zanieczyszczenia związane z produktem i procesem, np. agregaty, substraty komórek drobnoustrojów, białka komórek gospodarzy (HCP), DNA komórek gospodarzy (HCD), endotoksyny i antybiotyki.
Dlatego też kluczowe znaczenie ma zaprojektowanie wydajnego procesu oczyszczania DSP, który ma na celu usunięcie pewnych zanieczyszczeń i wytworzenie wysoce oczyszczonej substancji leczniczej o wysokiej jakości. Dodatkowo optymalizacja procesu oczyszczania może pomóc w zwiększeniu odzysku produktu, obniżeniu kosztów oraz poprawie skalowalności i powtarzalności procesu.
Słowa kluczowe: rozwój, optymalizacja i walidacja procesu, proces oczyszczania, chromatografia, eliminacja zanieczyszczeń, usuwanie HCP, eliminacja HCD, usuwanie endotoksyn, denaturacja i ponowne fałdowanie białek, składanie VLP, koniugacja
Zastosowanie: przemysł biofarmaceutyczny, medycyna ludzka, medycyna zwierzęca, szczepionki, rekombinowane wielkocząsteczkowe leki biologiczne, rekombinowane leki biologiczne, odczynnik biologiczny
Rozwiązania DSP firmy Yaohai Bio-Pharma
Mamy duże doświadczenie w izolowaniu docelowych białek lub plazmidów ze złożonych matryc poprzez opracowywanie i optymalizację dalszego procesu oczyszczania. Istnieją różne rodzaje operacji jednostkowych odpowiednich do oczyszczania produktów biologicznych, w tym wirowanie, filtracja, homogenizacja, liza alkaliczna, ultrafiltracja, wytrącanie, denaturacja i ponowne fałdowanie białek, chromatografia itp.
Nasze dostępne usługi rozwoju oczyszczania obejmują:
- Opracowanie całego procesu oczyszczania od pobrania komórek lub supernatantu do końcowego składnika aktywnego.
- Optymalizacja procesu oczyszczania w oparciu o zanieczyszczenia produktowe i procesowe w celu podniesienia jakości i bezpieczeństwa produktu np. HCP, HCD, endotoksyny.
- Definicja i optymalizacja kluczowych parametrów w jednej lub kilku operacjach jednostkowych, w tym liza komórek, filtracja z przepływem stycznym, przesiewanie żywicy, chromatografia, denaturacja i ponowne fałdowanie białek itp.
- Optymalizacja procesu pod kątem jakości, wydajności, odzysku, kosztów i skalowalności.
- Walidacja dalszego procesu oczyszczania.
- Ocena zakresu parametrów oparta na ryzyku i projektowanie eksperymentów (DoE) w modelowaniu procesów.
Szczegóły usługi
Standaryzowane platformy oczyszczania białek lub plazmidów opierają się na wielu surowych etapach oczyszczania i mniej niż 4 etapach chromatografii, obejmujących wychwytywanie, oczyszczanie pośrednie i polerowanie.
| Szczegóły usługi |
Operacje jednostek |
parametry |
| Surowe oczyszczanie |
Wirowanie |
Prędkość obrotowa, czas |
| Homogenizacja wysokociśnieniowa |
Całkowita zawartość substancji stałych, ciśnienie, cykle |
| Ciągła liza alkaliczna |
Stosunek ponownie zawieszonych komórek do roztworu do lizy, czas lizy |
| Filtracja z przepływem stycznym |
Materiał membrany i wielkość porów, natężenie przepływu surowca, ciśnienie transmembranowe (TMP), stosunek objętości filtratu do powierzchni membrany |
| Osad |
Rodzaj i stężenie środka strącającego, dodatek, pH, temperatura, czas |
| Denaturacja i ponowne fałdowanie |
Solubilizacja białek ciał inkluzyjnych |
Stężenie środka denaturującego (np. mocznik, guanidyna HCl, silny detergent jonowy), detergenty (np. dodecylosiarczan sodu, SDS), środki redukujące (np. ditiotreitol, DTT), środki chelatujące (kwas etylenodiaminotetraoctowy, EDTA), temperatura, czas |
| Ponowne fałdowanie białek |
Metody ponownego fałdowania (rozcieńczanie, dializa lub ponowne fałdowanie SEC), stężenia białek, bufory, pH, temperatura, czas, środki utleniające i redukujące (np. glutation, GSH/utleniony glutation, GSSH, DTT/GSSH, cysteina/cystyna), dodatki małocząsteczkowe (L-arginina, mocznik, guanidyna/HCl i detergenty) |
| Wychwytywanie, pośrednie oczyszczanie i polerowanie |
AC (chromatografia powinowactwa) |
Kilka rodzajów żywicy/kolumny chromatograficznej (np. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), długość i średnica kolumny, skład buforu, objętość wtrysku, skład fazy ruchomej (adsorpcja i desorpcja), pH, natężenie przepływu, wiązanie, Warunki przemywania i elucji. |
| IEX (chromatografia anionowa lub kationowymienna) |
| HIC (chromatografia oddziaływań hydrofobowych) |
| Odsalanie i/lub chromatografia wykluczania (SEC) |
| RPC (chromatografia z odwróconą fazą) |
| MMC, chromatografia w trybie mieszanym |
Case study
Case 1
Zlecono nam opracowanie i optymalizację dalszego procesu oczyszczania w celu zwiększenia czystości białka z 85% do 90% przy jednoczesnej redukcji etapów chromatografii.
Firma Yaohai zapewniła solidny i skalowalny proces oczyszczania obejmujący 3 etapy chromatografii dla docelowego białka, czyli alergii bakteryjnej. A ostateczna czystość osiągnęła 95%.
Case 2
Yaohai został wyznaczony przez naszego klienta do optymalizacji procesu usuwania endotoksyn ze szczepionki zawierającej cząstki wirusopodobne (VLP).
Nasz zespół przeprowadził optymalizację parametrów chromatografii i przygotował substancję leczniczą o czystości 98% i pozostałości endotoksyn 12.8EU/mg.
Nasze doświadczenia
- Zajmowaliśmy się opracowywaniem i produkcją różnych dużych cząsteczek, w tym rekombinowanych szczepionek podjednostkowych, VLP, hormonów (insulina, GLP-1, hormon wzrostu), cytokin (Interleukina-2/IL-2, IL-15, IL-21 ), czynniki wzrostu (EGF, FGF, NGF), nanociał/przeciwciała jednodomenowe (sdAbs), enzymy itp.
Wyposażenie
Używamy wiodących w branży systemów AKTA Pure, AKTA Avant i Preparative HPLC do wykonywania różnych metod chromatografii, w tym chromatografii powinowactwa, wymiany jonowej, oddziaływań hydrofobowych, odwróconej fazy i chromatografii wykluczania.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NIE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
