Niestandardowa synteza saRNA
Samoamplifikujący mRNA (saRNA), znany również jako RNA replikonu, koduje sekwencje mRNA transkrypcji in vitro (IVT) i wirusowe geny replikazy pochodzące z alfawirusów lub flawiwirusów. Wirusowe geny replikazy umożliwiają samoamplifikację mRNA, co skutkuje zwiększoną ekspresją białka i minimalną wymaganą dawką RNA w porównaniu z nieamplifikującymi mRNA. Innym aspektem jest to, że saRNA jest stosunkowo dużą cząsteczką (ponad 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma opracowała zestaw technologii syntezy mRNA w celu zapewnienia nieamplifikującego mRNA i samoamplifikującego się mRNA (1000 nt ~ 14000 nt), takich jak projektowanie i optymalizacja sekwencji, IVT, oczyszczanie, liofilizacja i kapsułkowanie nanocząstek lipidowych (LNP) . Wszystkie produkty są wypuszczane zgodnie z rygorystycznymi standardami kontroli jakości.
Ryc.1 Cechy strukturalne mRNA IVT: mRNA konwencjonalne, kołowe i samowzmacniające się.
Cechy sekwencji samowzmacniającego się mRNA
Samowzmacniający się RNA składa się z czterech białek niestrukturalnych (oznaczonych jako nsP1, nsP2, nsP3 i nsP4), które pochodzą z alfawirusów, wirusa wenezuelskiego końskiego zapalenia mózgu (VEEV). Wśród nich nsP1 wykazuje podwójną aktywność enzymatyczną, mianowicie GTazę i N7MTazę, podczas gdy nsP2 posiada aktywność RTPazy, kluczową dla zamykania mRNA IVT w celu wytworzenia struktury Cap 0. Dodatkowo nsP2 służy jako proteaza i helikaza, ułatwiając skomplikowane przetwarzanie całego kompleksu nP. Dokładna funkcja nsP3 pozostaje nieuchwytna, jednakże angażuje się on w interakcje z różnymi białkami komórek gospodarza, przyczyniając się w ten sposób do osłabienia odpowiedzi przeciwwirusowej gospodarza.
Region promotora subgenomowego alfawirusa (SGP) jest zlokalizowany przed genem będącym przedmiotem zainteresowania (GOI). Element SGP ułatwia inicjację transkrypcji GOI poprzez ominięcie odczytu sekwencji kodującej wirusowe białka nP.
Ryc.2 Synteza i testy komórkowe saRNA eGFP platformy Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Niestandardowe rozwiązania saRNA
Protokół syntezy saRNA jest podobny do mRNA: Niestandardowa synteza mRNA
- Projekt sekwencji
- Przygotowanie szablonu plazmidowego
- transkrypcja in vitro (IVT)
- Capping enzymatyczny mRNA
- Ograniczenie kotranskrypcji mRNA
- Oczyszczanie mRNA
- Liofilizacja mRNA
- Enkapsulacja LNP
- Analiza i testowanie
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NIE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
