W porównaniu do dwuetapowego enzymatycznego kapowania, metoda jednokrokowego współtranskrypcyjnego kapowania może znacząco uprościć proces. Metoda jest skierowana ku wynikowi i obejmuje dodawanie analogów kapowych do reakcji transkrypcji in vitro (IVT). Analogi kapowe mogą być wprowadzane na początku transkrypcji, a po jej zakończeniu uzyskuje się mRNA z strukturą kapową. Obecnie trzecie generacje analogów kapowych mogą unikać odwróconego kapowania i bezpośrednio dodawać strukturę Cap 1 do produktu transkrypcji.
Ze względu na immunogeniczność mRNA w organizmie i wydajność translacji, proces IVT często stosuje pewne rodzaje zmodyfikowanych NTP-ów, a powszechnie używane zmodyfikowane nukleotydy to pseudourydyna (Ψ), N1-metylpseudourydyna (N1Ψ) oraz 5-metylcytozyna (5mC).
Rysunek: Schemat reakcji kowypisywania i kapowania mRNA
Szczegóły usług
Usługa |
Szczegóły usług |
Okres dostawy (dzień roboczy) |
Kapowanie kowypisywane |
Reakcja transkrypcyjna in vitro (Odpowiednik czystego Kapu) |
1-2 |
| Modyfikacje nukleotydowe (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Usunięcie szablonu DNA (DNaza I) |
Optymalizacja warunków IVT - opcjonalnie |
Projektowanie i optymalizacja składników reakcji |
3-7 |
Nasze cechy
- Zróżnicowane strategie modyfikacji nukleotydów
Wiele opcjonalnych strategii modyfikacji nukleotydów może poprawić wyrażanie białek.
- Zoptymalizowany system reakcji
Osiągnij wysoki stosunek transkrypcji i efektywność nakładania kapelusza.
- Stabilny proces nakładania kapelusza
Osiągnij stopień nakładania większy niż 95%.
- Swoisty kontrolowany RNase
Efektywnie zapobiegaj degradacji mRNA, ściśle kontrolując RNazę w środowisku doświadczalnym i zużytkach.
Badanie przypadków
Yaohai Bio-Pharma stworzyło dojrzały platformowy proces współtranskrypcyjnego nakładania kapelusza, używając czystych analogów kapelusza, aby bezpośrednio dodać strukturę Cap1, unikając jednocześnie odwróconego nakładania kapelusza. Po standardowej przetwarzce próbek i detekcji elektroforezą kaptelową (CE), stopień nakładania kapelusza dla mRNA zielonego białka fluorescencyjnego (eGFP) może osiągnąć ponad 95%.
efektywność nakładania kapelusza dla mRNA eGFP większa niż 95%
MRNA eGFP i mRNA mCherry przygotowane przez kowypisywanie z zakonczonymi grupami są transfekowane do komórek 293T, odpowiednio, a po 48 godzinach obserwuje się silny sygnał fluorescencyjny, co sugeruje, że mRNA jest wyrażany efektywnie w komórkach 293T.
Ekspresja mRNA eGFP i mRNA mCherry w komórce 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
