Zgodnie z centralnym dogmatem, RNA messengerskie (mRNA) jest mostkiem przekazywania materiału genetycznego od DNA do białek.
mRNA spełnia funkcję biologiczną poprzez kodowanie białek in vivo, a dojrzały mRNA w organizmach eukariotycznych składa się z pięciu składników: 5' Kap (struktura kapowa), 5' UTR (region niekodujący), ORF (otwarty ramiec czytelny), 3' UTR oraz ogon 3' polyA (ogon poliadenylowy).
Szczegóły usług
| Proces |
Opcjonalne Usługi |
Szczegóły usług |
Okres dostawy (Dzień) |
| projektowanie i optymalizacja sekwencji mRNA |
Projektowanie i optymalizacja sekwencji kodujących |
Wyrównanie sekwencji CDS
Optymalizacja kodonów sekwencji CDS
|
1 |
| Projektowanie i optymalizacja sekwencji niekodujących |
projektowanie i optymalizacja sekwencji 5' UTR
projektowanie i optymalizacja sekwencji 3' UTR
projektowanie i optymalizacja sekwencji polyA
|
1-2 |
Opcje dostosowywalne
| 5’ UTR/3’ UTR |
- Naturalna sekwencja UTR
- Mutant/Modyfikowana sekwencja UTR
|
| ogon PolyA 3' |
- ogon 100A ~120A (zalecany)
- Podzielony ogon polyA
- Inny niestandardowy ogon
|
Powszechne Strategie Projektowania Sekwencji mRNA
| komponenty mRNA |
Funkcje Biologiczne |
Strategie Optymalizacji |
| kap 5' |
Chroni mRNA przed degradacją przez eksonukleazy i działa w parze z ogonem polyA na końcu 3', białkiem wiążącym polyA oraz czynnikiem inicjującym translację, aby rozpocząć translację białka. |
Naturalna struktura Cap1 unika receptorów rozpoznawania wzorców i tym samym zmniejsza naturalną odpowiedź immunologiczną, co można osiągnąć za pomocą jednokrotnego kapowania transkrypcyjnego lub dwustopniowego kapowania enzymatycznego [zobacz kapowanie enzymatyczne mRNA i kapowanie transkrypcyjne dla szczegółów]. |
| uTR 5' |
UTR 5' może być rozpoznawane przez rybosomy, regulować translację mRNA i wpływać na stabilność mRNA. |
Zawierają sekwencje Kozaka bez bardzo stabilnej struktury sekundarnej. Naturalne UTR-y mocno ekspresowanych genów są preferowane dla transkrypcji in vitro (IVT) mRNA, takie jak α-globina i β-globina. |
| CDS |
Regiony kodujące białka oraz sekwencje kodujące antygeny, przeciwciała lub inne funkcjonalne białka. |
Optymalizacja kodonów zwiększa poziom translacji, przy czym należy zauważyć, że niektóre nieoptymalne kodony mogą odgrywać rolę w fałdowaniu białek. |
| 3' UTR |
Regulują translację i stabilność mRNA. |
Naturalne UTR-y mocno ekspresowanych genów są preferowane dla mRNA IVT, takie jak α-globina i β-globina. |
| 3' polyA ogon |
Regulują wyrażanie białek i chronią strukturę kapowa przed degradacją. |
Wymagana jest odpowiednia długość (100-150 bp); kodowanie ogona polyA na plazmidzie szablonowym zapewnia bardziej określoną długość ogona polyA. |
Nasze cechy
- Zróżnicowany wybór źródła UTR
Wielokrotne źródła wysoce ekspresyjnych naturalnych i zmodyfikowanych bibliotek UTR; dojrzała strategia modyfikacji UTR;
- Awangardowy zespół optymalizacji CDS
Współpraca z profesjonalnym zespołem algorytmów sztucznej inteligencji w celu ukończenia optymalizacji kodonów.
- Równomierny rozkład ogona polyA
Dodawanie sekwencji polyA na podstawie szablonów DNA, aby kontrolować długość mRNA bardziej precyzyjnie.
- Zróżnicowane kombinacje optymalizacji
Osiągnięcie efektywnej ekspresji mRNA o niskiej immunogeniczności.
Badanie przypadków
Projekt sekwencji mRNA z dwoma reporterami: mRNA mCherry-eGFP
Usługa mRNA Yaohai Bio-Pharma jest nieustannie aktualizowana dzięki projektowi i optymalizacji tandemowej sekwencji dwóch genów reporterów, co umożliwia współekspresję dwóch genów.
Korzystając z konwencjonalnego reagentu do transfekcji, mRNA sekwencji tandemowej podwójnego genu mCherry-eGFP jest transfekowany do komórek 293T, a dwie sygnały fluorescencyjne - mCherry (czerwony) i zintensyfikowany biały białkowy fluorescencyjny białek (eGFP) - są wykrywane po 48 godzinach z jednoczesnym wyrażeniem, a wykres stosowany jest wyróżniony na żółto.
Ekspresja mRNA mCherry-eGFP w komórce 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
