Kolisty mRNA (circRNA) jest powszechnie wykorzystywany w badaniach funkcji genów lub białek. W międzyczasie jest również popularny w opracowywaniu biologicznych produktów profilaktycznych i leczniczych, podobnie jak mRNA.
Yaohai Bio-Pharma opracowała zestaw technologii syntetycznych dla circRNA, aby dostarczać wysokiej jakości RNA, takie jak projektowanie i optymalizacja sekwencji, transkrypcja in vitro (IVT), kolizacja/kolizjonowanie, czyszczenie oraz otaczanie lipidowymi nanopartycułami (LNP). Wszystkie produkty są wydawane zgodnie ze ścisłymi standardami kontroli jakości (QC).
W porównaniu do liniowego mRNA, RNA kołowe (circRNA) są bardziej stabilne strukturalnie i stanowią główne miejsce zainteresowań w obecnych badaniach nad lekami nukleinowymi. Posiada szerokie zastosowanie w różnych dziedzinach, zarówno jako kodujące circRNA, jak i niekodujące circRNA, w tym szczepionki profilaktyczne przeciwko chorobom zakaźnym, szczepionki onkologiczne o charakterze leczniczym, leki onkologiczne o charakterze leczniczym, terapia zastępcza białek, medycyna regeneracyjna, terapia komórkowa i genowa (CGT), rola gąbki molekularnej oraz RNA aptamer.
Proces | Opcjonalne Usługi | Szczegóły usług | Okres dostawy (Dzień) |
projektowanie i optymalizacja sekwencji circRNA | Projektowanie i optymalizacja sekwencji kodujących | Optymalizacja kodonów sekwencji CDS | 1 |
Projektowanie i optymalizacja sekwencji niekodujących | Sekwencje intronów i ekstronów, projektowanie i optymalizacja ram homologicznych oraz spacerów | 1-2 | |
Przygotowanie plazmidu kołowego | Synteza genu | Synteza Genów (zewnętrzna firma) | 7-10 |
Wzmacnianie Plazmidów | Wzmacnianie Plazmidów | 2 | |
Ekstrakcja Plazmidów | |||
Przygotowanie Plazmidu Liniowego | Linearizacja i czyszczenie plazmidu | Linijność plazmidu | 1 |
Czyszczenie DNA po Liniarizacji | |||
Transkrypcja in vitro i Cyklizacja | Transkrypcja in vitro i Cyklizacja | Reakcje Transkrypcji in vitro i Cyklizacji | 1-2 |
Trawienie RNase R | |||
Optymalizacja - opcjonalna | Skład Reakcji, Optymalizacja Czasu | 2-5 | |
czyszczenie circRNA | Konwencjonalna Metoda Oczyszczania | Wypadek chlorku litu | 1 |
Czyszczenie magnesowymi kulami | 1 | ||
Wysoko Czyste Oczyszczanie circRNA | Chromatografia Płynowa Wysokiej Wydajności (HPLC) w Przygotowaniu | 1-2 | |
Wymiana buforu | Ultrafiltracja | 1 | |
liofilizacja circRNA | Wypełnianie Probek | Wypełnienie | 2-3 |
Liofilizacja | Wstępne zamarzanie | ||
Pierwsze suszenie (sublimacja) | |||
Drugie suszenie (desorpcja) | |||
obejście circRNA-LNP | Encapsulacja LNP | Wstępne przetwarzanie materiału i cieczy | 2 |
Mieszanie w urządzeniu mikrofluidycznym | |||
Wymiana buforu | Filtracja przepływem stycznym | 1 | |
Zasterylizowany | Filtrowanie | ||
Kontrola jakości DNA plazmidowego | Stężenie/pureza | Spektrofotometria ultrafioletowa (UV) | 1-2 |
Konformacja plazmidu | Elektroforeza w Gelu Agarowym (AGE) | ||
Elektroforeza Kapilarna (CE) - Opcjonalnie | |||
Identyfikacja Plazmidów | Identyfikacja Enzymów Restrykcyjnych/AGE | ||
Kontrola jakości circRNA | Stężenie/pureza | Spektrofotometria ultrafioletowa (UV) | - |
Czystość | Elektroforeza w Gelu Agarozowym (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - opcjonalnie | 1 | ||
Kontrola Jakości circRNA-LNP | Efektywność enkapsulacji | Metoda RiboGreen | 1 |
Wielkość cząstek | Dynamiczna Sygnalizacja Światła (DLS) | 1 | |
Indeks polidyspersji | Dynamiczna Sygnalizacja Światła (DLS) | 1 | |
Potencjał Zeta | Dynamiczna Sygnalizacja Światła (DLS) | 1 | |
Badanie mocy oparte na komórkach | Transfekcja komórkowa | Przygotowywanie komórek, transfekcja komórkowa | 4 |
Wykrywanie białka docelowego | Obserwacja fluorescencyjna, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transfekowaliśmy ulepszony zielony białek fluorescencyjny circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, lucyferaza circRNA do komórek 293T i wykryliśmy białko docelowe za pomocą fluorescencji, luminescencji lub barwnego sygnału, western blot (WB), enzymowo powiązanego testu immunologicznego (ELISA).
Badania mocy oparte na komórkach dla próbek circRNA przez Yaohai Bio-Pharma