Podstawą enkapsulacji jest zaprojektowanie i rozwój systemu dostarczania. Dobrze zaprojektowany system dostarczania pozwala cząsteczkom circRNA przedostać się do organizmu bez rozkładu przez enzymy RNA, a następnie skutecznie dostarczyć do miejsca docelowego, przejść przez błonę komórkową i uwolnić się wewnątrzkomórkowo.
Nanocząstki lipidowe (LNP) to najlepszy dostępny system dostarczania, oferujący zalety w zakresie kapsułkowania, ekspresji in vivo i bezpieczeństwa in vivo w porównaniu z innymi systemami dostarczania. LNP zawierające fragmenty kwasów nukleinowych są łatwo wchłaniane do komórek i tworzą ciała wewnątrzkomórkowe. Po wejściu do komórki kwaśne środowisko ciała wewnątrzkomórkowego ulega protonowaniu i ładuje dodatnio głowę zjonizowanego lipidu, łącząc się w ten sposób z wewnętrzną błoną ciała wewnątrzkomórkowego i uwalniając docelowy kwas nukleinowy do komórki w celu działania.
Usługa Yaohai Bio-Pharma dotycząca circRNA jest stale udoskonalana i może świadczyć usługę kapsułkowania circRNA-LNP w celu optymalizacji odpowiednich krytycznych parametrów procesu oraz poprawy spójności i powtarzalności produkcji leków circRNA.
Przetwarzanie | Szczegóły usługi | Okres dostawy (dzień) | Dostarczane |
Kapsułkowanie circRNA-LNP | Obróbka wstępna materiału i cieczy | 2 | Produkt leczniczy circRNA-LNP (DP) |
Mieszanie za pomocą urządzeń mikroprzepływowych | |||
Filtracja z przepływem stycznym | 1 | ||
Filtracja sterylizująca | |||
Kontrola jakości circRNA-LNP | Wydajność kapsułkowania | 1 | Sprawozdanie z badań |
Wielkość cząstek i wskaźnik polidyspersyjności | |||
potencjał zeta |
Szybka synteza, wysoka wydajność badawczo-rozwojowa i wstępnie zoptymalizowane rozwiązania;
Współczynnik kapsułkowania może osiągnąć ponad 90%;
Wielkość nanocząstek lipidów można kontrolować zmieniając szybkość i stosunek wstrzykiwania płynu;
Produkty circRNA-LNP zostały zweryfikowane poprzez ekspresję komórkową in vitro i mogą skutecznie wyrażać docelowe białko.
Przygotowuje się próbki circRNA LNP-eGFP i różne ich dawki (1 ug, 2 ug i 4 ug) bezpośrednio transfekuje się do komórek 293T w celu sprawdzenia, czy mogą one wyrażać docelowe białko. Po 48 godzinach transfekcji można zaobserwować wyraźny sygnał fluorescencji i występuje efekt zwiększania dawki w zakresie intensywności fluorescencji.
Lipo-circ_eGFP, złożony z liposomów i niekapsułkowanego circRNA eGFP, przyjmuje się jako kontrolę.