mRNA jest szeroko stosowane w badaniu funkcji genów lub białek. Tymczasem jest to powszechne w rozwoju profilaktycznych i terapeutycznych leków biologicznych. Jako powszechna strategia syntezy cząsteczek RNA, transkrypcja in vitro (IVT) umożliwia nam skuteczne uzyskiwanie dostosowanych transkryptów.
Yaohai Bio-Pharma opracowała zestaw technologii syntezy mRNA w celu zapewnienia wysokiej jakości RNA, takich jak projektowanie i optymalizacja sekwencji, IVT, oczyszczanie, liofilizacja i kapsułkowanie nanocząstek lipidowych (LNP). Wszystkie produkty są wydawane zgodnie z rygorystycznymi standardami kontroli jakości (QC).
Wraz z wybuchem pandemii COVID-19 w 2020 r. technologia mRNA osiągnęła ogromny postęp, a związane z nią badania i zastosowania osiągnęły bezprecedensowy rozwój, w tym szczepionki profilaktyczne do zapobiegania chorobom zakaźnym, terapeutyczne szczepionki i leki onkologiczne, terapia nowotworów, białka terapii zastępczej, medycyny regeneracyjnej oraz terapii komórkowej i genowej (CGT).
Szczepionka mRNA | Terapia mRNA |
|
Przetwarzanie | Usługa opcjonalna | Szczegóły usługi | Termin dostawy (dzień roboczy) | Dostarczalne |
Projektowanie i optymalizacja sekwencji mRNA | Projektowanie i optymalizacja sekwencji kodujących | Projektowanie sekwencji CDS i optymalizacja kodonów | 1-3 | Plik sekwencji |
Projektowanie i optymalizacja sekwencji niekodujących | Projektowanie i optymalizacja sekwencji UTR, poliA | |||
Szablon transkrypcji Przygotowanie plazmidu | Preparat rekombinowanego plazmidu | Synteza genów | 7-10 | |
Amplifikacja i ekstrakcja plazmidu | 4 | |||
Linearyzacja i oczyszczanie plazmidów | ||||
Transkrypcja mRNA in vitro | Capping kotranskrypcyjny (metoda jednoetapowa) | Transkrypcja in vitro (IVT) / analog Cap | 1-2 | N / A |
Modyfikacje nukleotydów (modyfikacje UTP/CTP) | ||||
Usuwanie matrycy DNA (DNaza I) | ||||
Capping enzymatyczny (proces dwuetapowy) | IVT | 2-3 | ||
Modyfikacje nukleotydów (modyfikacje UTP/CTP) | ||||
Usuwanie matrycy DNA (DNaza I) | ||||
Oczyszczanie mRNA (chlorek litu/kulki magnetyczne) | ||||
Capping enzymatyczny | ||||
Oczyszczanie mRNA | Konwencjonalny schemat oczyszczania | Wytrącanie chlorku litu | 1 | substancja lecznicza mRNA |
Oczyszczanie kulkami magnetycznymi | ||||
Schemat oczyszczania na kolumnie chromatograficznej | Połączenie wielu metod chromatograficznych | 1-2 | ||
Wymiana bufora | Ultrafiltracja | 1 | ||
Liofilizacja mRNA | Liofilizacja | Wstępne zamrażanie | 2-3 | Liofilizowany proszek mRNA |
Suszenie wstępne (sublimacja) | ||||
Suszenie wtórne (desorpcja) | ||||
Enkapsulacja mRNA | Hermetyzacja LNP | Hermetyzacja LNP | 2-3 | Produkt mRNA-LNPDlek |
Zagęszczanie i wymiana buforu | ||||
Analiza jakości mRNA | mRNA substancja lecznicza/liofilizowany proszek | Koncentracja, czystość | 1 | Sprawozdanie z badań |
Integralność, skuteczność zamykania, rozkład ogona poliA | 2-5 | |||
Produkt leczniczy mRNA-LNP | Wydajność kapsułkowania | 1 | ||
Rozmiar i rozkład cząstek | ||||
Ładunek powierzchniowy | ||||
Walidacja ekspresji mRNA | Ocena komórek 293T | Powlekanie komórek | 4 | |
Przejściowa transfekcja komórek | ||||
Obserwacja sygnału fluorescencji | 1-3 | |||
Western blot (WB) / Test immunoenzymatyczny (ELISA) |
5' Czapka | ▪ Nieograniczone ▪ Cap0, współograniczony ▪ Cap1, współograniczony ▪ Cap1, capping enzymatyczny |
5'UTR/3'UTR | ▪ Sekwencja natury UTR ▪ Zmutowana/zmodyfikowana sekwencja UTR |
3' ogon PolyA | ▪ 100A ~120A ogon (zalecane) ▪ Segmentowany ogon z poliA ▪ Inne niestandardowe ogony |
Zmodyfikowane nukleozydy | ▪ Niemodyfikowane podstawy ▪ Pseudourydyna (Ψ) ▪ N1-metylopseudourydyna (N1Ψ) ▪ 5-metylocytozyna (m5C) ▪ 5-metylourydyna (m5U) ▪ 5-metoksyurydyna (5 moU) ▪ 2-tiourydyna (s2U) ▪ 2′-O-metylo-U ▪ Inne modyfikacje |
Zintegrowany przepływ usług
Świadczymy szereg usług, począwszy od projektowania sekwencji typu front-end, po przygotowanie mRNA, kontrolę jakości i walidację ekspresji.
Międzynarodowe, najnowocześniejsze projektowanie i optymalizacja sekwencji
Profesjonalne projektowanie i optymalizacja sekwencji mRNA ułatwiają efektywną ekspresję mRNA.
Zróżnicowane modyfikacje nukleotydów
Skutecznie zwiększają ekspresję mRNA i zmniejszają niekorzystne odpowiedzi immunologiczne mRNA.
Dojrzała platforma oczyszczania
Łącząc konwencjonalną i samodzielnie opracowaną metodę oczyszczania, uzyskuje się próbki mRNA o wysokiej czystości
Kompletna platforma kontroli jakości
Wzbogać opcje kontroli jakości, aby spełnić wymagania rutynowych testów, takie jak stężenie, czystość A260/280 i integralność, a także wysokie wymagania kontroli jakości, takie jak wydajność ograniczania/dystrybucja poliA.
Szybka dostawa
Dostosowany mRNA można dostarczyć w ciągu zaledwie 7 dni, z wyjątkiem syntezy sekwencji zlecanej na zewnątrz.