Zajętość miejsca N-glikozylacji jest cechą fizjologiczną glikoproteków i przede wszystkim generuje N-glikany. Usługa analizy zajętości miejsca N-glikozylacji oferowana przez Yaohai Bio-Pharma przeprowadzana jest za pomocą trawienia, wydzielania, wzbogacania i analizy przy użyciu chromatografii ciekłej z elektrosprzeżonym jonizowaniem oraz spektrometrii masowej (LC-ESI-MS/MS).
Byliśmy zaangażowani w charakteryzację strukturalną białek różnych dużych cząsteczek, w tym szczepionek rekombinacyjnych, Nanociał, VHH, antyciał pojedynczo-domenowych (sdAbs), fragmentów antyciał, hormonów/peptydów, cytokin, czynników wzrostu (GF), enzymów, kolagenu itp.
Wymagania normative dotyczące zajętości miejsca N-glikozylacji
Zgodnie z wytycznymi ICH Q6B, „dla glikoprotein określana jest zawartość węglowodanów (neutralne cukry, aminocukry i kwasy syjamicowe). Ponadto struktura łańcuchów węglowodanowych, wzorzec oligosacharydów (profil antenowy) oraz miejsca glikozylacji łańcucha polipeptydowego są analizowane w jak największym zakresie.”
Metoda analityczna
| Analizy |
Metody |
| Zajętość miejsca N-glikozylacji |
LC-MS po trawieniu deglikozylazą i proteazą |
Procedury
1. Trawienie białek w celu uzyskania małych fragmentów peptydowych.
2. Wydzielanie N-glikanów za pomocą endoglikozidazu H lub PNGase F. Endoglikozidaza H rozdziela wiązanie między dwoma resztami GlcNAc w rdzeniu N-związanych glikanów, podczas gdy PNGase F jest glukoamidazą, która tną wiązanie między GlcNAc i Asn, uwolniając cały łańcuch cukrów i przekształcając Asn w Asp z zwiększeniem masy o 1-Da.
3. Wzbogacanie N-glikopeptydów za pomocą HILIC (Chromatografia Ciekła z Hydrofilicznym Interakcją)
4. Analiza zajmowania miejsc N-związanej glikozylacji za pomocą LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
