Dane z mapowania peptydów na podstawie chromatografii ciekłej - spektrometrii mas (LC-MS) dostarczą dużą ilość informacji o strukturze pierwotnej i wyższych porządków białek rodzimych i rekombinowanych, w tym pokrycie sekwencji kwasów aminowych, pochodne powstające w wyniku po-transkrypcyjnych modyfikacji (PTMs, np. glikozylacja, utlenianie, deamidacja), wiązania dwusulfanowe itp.
Yaohai Bio-Pharma oferuje usługi analizy mapowania peptydów dla waszego białka docelowego za pomocą LC-MS, aby przyspieszyć badania nad strukturą białka.
Byliśmy zaangażowani w charakteryzację strukturalną białek różnych dużych cząsteczek, w tym szczepionek rekombinacyjnych, Nanociał, VHH, antyciał pojedynczo-domenowych (sdAbs), fragmentów antyciał, hormonów/peptydów, cytokin, czynników wzrostu (GF), enzymów, kolagenu itp.
Wymagania normative dotyczące mapowania peptydów
Wskazówka ICHQ6B zaleca: „Wybieralne rozdrobnienie produktu na dyskretne peptydy jest wykonywane za pomocą odpowiednich enzymów lub chemikalii, a uzyskane fragmenty peptydowe są analizowane metodą HPLC lub inną odpowiednią procedurą analityczną. Fragmenty peptydowe należy identyfikować w miarę możliwości za pomocą technik takich jak analiza składu aminokwasów, sekwencjonowanie N-terminalnego lub spektrometria mas (MS). Mapowanie peptydowe substancji czynnej lub leku (DP) za pomocą odpowiednio zwalidowanej metody to metoda często stosowana do potwierdzenia pożądanego struktury produktu przy wydawaniu partii.”
Metody analityczne
| Analizy |
Metody |
| Mapowanie peptydowe |
Trawienie proteazy i chromatografia ciekła-spektrometria mas (LC-MS) |
Procedura analityczna
1. Redukcja i alkilacja
Celem jest zmniejszenie mostów disulfidowych i zablokowanie powstałego wolnego tiolu. Redukcja mostów disulfidowych pomaga otworzyć strukturę białka, co sprawia, że trawienie proteolityczne jest bardziej efektywne. Ten krok spowoduje również przerwanie mostów między łańcuchami w przypadku wielołańcuchowych białek mających mosty disulfidowe łączące łańcuchy (np. przeciwciała monoklonalne, mAbs).
2. Trawienie białka za pomocą enzymów
Celem jest rozkład białka na peptydy. Wybieramy enzymy na podstawie teoretycznego ciągu białka i wiedzy o teoretycznym trawieniu białka przez enzymy. Wybór enzymów w ten sposób powinien dać najlepszą analizę mapowania peptydów.
3. Analiza trawionych peptydów Użycie On-line Chromatografii Ciekłej Wysokiej Wydajności w Fazie Odwrotnej z Detekcją Ultrafioletową (UV) i Detekcją Masowej Spektrometrii Elektrosprzyną (LC/ES-MS).
Oddzielenie peptydów na podstawie polarności za pomocą LC (chromatografia ciekła w fazie odwrotnej)
Gdy peptyd eluuje z kolumny LC, spektrometr masa wygeneruje informacje o masie wraz z informacjami o jonach ułamkowych, co pozwala nam określić informacje dotyczące sekwencji. Korzystamy z informacji o sekwencji, aby potwierdzić tożsamość peptydu i dostarczyć podstawowych informacji.
Możemy również generować informacje o fragmencie od peptydów, gdy wchodzą do źródła spektrometru masy z kolumny LC. W zależności od wymagań badania, jest to albo selektywna LC-MS/MS, czyli niezalektywna, która może być uważana za formę tandemowego MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
