Deamidacja łańcuchów bocznych glutamininy i asparaginiany jest powszechną modyfikacją pod względem wpływu na właściwości białek farmaceutycznych. Deamidacja może wystąpić w rezydach glutamininy, ale zwykle z dużo niższym tempem. Szybkości deamidacji są wpływane przez temperaturę, pH, lokalną strukturę białka oraz otaczające resztki aminokwasowe.
Yaohai BioPharma oferuje usługę testowania deamidacji aminokwasów, która pozwala wykryć deamidację aminokwasów za pomocą chromatografii ciekłej - spektrometrii masowej (LC-MS).
Byliśmy zaangażowani w badania charakterystyki strukturalnej białek różnych dużych cząsteczek, w tym szczepionek rekombinacyjnych, Nanociał, VHHs/Single-domain Antibodies (sdAbs), fragmentów przeciwciał, hormonów/peptydów, cytokin, czynników wzrostu (CF), enzymów, kolagenów itp.
Wymagania regulacyjne dotyczące deamidacji aminokwasów
Zgodnie z wytycznymi ICH Q6B, formy deamidowane mogą być wykrywane i charakteryzowane za pomocą chromatograficznych, elektroforetycznych i/lub innych odpowiednich metod analitycznych.
Metody analityczne
| Analizy |
Metody |
| Deamidacja |
Ciekła Chromatografia-Spektrometria Masy (LC-MS) |
Procedury
np., deamidacja asparaginianu
1. Enzymatyczne trawienie
2. LC-MS w warunkach Wysokiej Wydajności Ciekłej Chromatografii (HPLC)
3. Analiza danych
Deamidacja asparaginy zachodzi przez pośrednictwo suksynimidy (Suc), która jest podatna na racymizację i hydrolizę, co prowadzi do powstania czterech izomerów Asp, w tym L-Asp, L-IzoAsp, D-Asp i D-IzoAsp.
W teorii, deamidacja glutaminianu mogłaby generować cztery odpowiadające jej izomery glutyaminianu za pomocą procesu podobnego do deamidacji asparaginy.
Wysokowydajna spektrometria mas łatwo identyfikuje różnicę masy wynoszącą 1 Da między peptydami zawierającymi Asn/Gln a ich odpowiednikami zdeaminowanymi Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
