mRNA'nın İn Vitro Sentezi
MRNA'nın ana bileşenleri, mRNA fonksiyonunun sürdürülmesi için gerekli olan 5'-cap, 5'-UTR, açık okuma çerçevesi (ORF), 5'-UTR ve 5' poli A kuyruğudur. Araştırmacılar mRNA dizilerini ve yapılarını tanımlamak ve optimize etmek için çeşitli yöntemler kullandılar.
MRNA'nın sentezi, doğrusal DNA şablonları, RNA polimerazları (T3, T7 veya SP6), değiştirilmemiş veya değiştirilmiş nükleotidler, enzimler ve uygun reaktifler kullanılarak in vitro transkript (IVT) temelinde gerçekleştirilir.
5' Kapak Değişikliği
Ökaryositten alınan olgun mRNA dizileri, 7' ucunda bir 7-metilguanozin (m5G) başlığı gösterir; bu, mRNA stabilitesini ve translasyon verimliliğini artırır. mRNA'yı in vitro yakalamak için iki genel yöntem vardır. İlk olarak mRNA, m7GpppG yapısının bir başlık analoğunun (örneğin, CleanCap) IVT sistemine eklenmesiyle in vitro transkript ile birlikte kapatılabilir. Bu ortak transkripsiyonel kapatma yöntemi, doğal bir 5' kapsül yapısı sağlar ve kapatma verimliliğini yaklaşık %90-99'a çıkarır. İkinci olarak mRNA haritalaması, in vitro transkripsiyon reaksiyonunu takiben enzim reaksiyonlarının haritalanmasıyla da gerçekleştirilebilir.
PolyA Değişikliği
Poli(A) kuyruğu ayrıca mRNA'nın in vivo yarı ömrünü uzatır ve mRNA translasyon verimliliğini artırır. Amplifiye edilmiş poli(A) kuyruğunun uzunluğu 100-300 nükleotid olmalıdır. Ek olarak, modifiye edilmiş adenosin, poli A kuyruğunun hücresel RNaz bozulmasına karşı stabilitesini arttırır. Poli A kuyruğu, poli A'yı kodlayan DNA şablonu kullanılarak in vitro transkripsiyon yoluyla eklenebilir, böylece spesifik bir poli A sekansı uzunluğu elde edilir. Rekombinant poli A polimeraz, mRNA transkripsiyonundan sonra enzimatik poliadenilasyon yoluyla da kullanılabilir.
Nükleotid Modifikasyonu
Modifiye edilmiş nükleosidler, model tanıma reseptörlerinin (PRR) tanınmasını ve/veya aktivasyonunu inhibe edebilir ve mRNA aşılarının etkinliğini iki tamamen farklı şekilde artırabilir. Psödouridin (ψ), 1-metilpsödouridin (m1ψ), tiyoüridin (s4U) ve 5-metilsitozin (m5C) dahil olmak üzere kimyasal olarak modifiye edilmiş bazı nükleosidlerin eklenmesi, TLR7/8 ve diğer doğal immün reseptörlerin aktivasyonunu önleyebilir ve bu da immünojeniteyi önemli ölçüde azaltır. mRNA'nın.
mRNA Dağıtım Sistemi
MRNA'nın fonksiyonunu sürdürmek için konakçı sitoplazmasına girmesi ve spesifik antijenleri eksprese etmesi gerekir. mRNA aşılarının ve terapötiklerinin karşılaştığı en zor zorluklardan biri, mRNA'nın hedef hücrelere yeterince yüksek translasyon seviyeleriyle iletilmesinde yatmaktadır; çünkü bu, son derece spesifik ve etkili mRNA dağıtım sistemleri gerektirir. Dendritik hücreler (DC'ler), protamin, katyonik polimerler ve katyonik lipozomlar dahil olmak üzere çeşitli mRNA dağıtım vektörleri geliştirilmiş ve kullanılmıştır.
Katyonik lipitlerin mRNA ve diğer preparatlarla kompleksleri, toplu olarak lipit nanopartikülleri (LNP'ler) adı verilen 80-200 nm boyutunda nanopartiküller oluşturabilir. En gelişmiş mRNA dağıtım sistemlerinden biri olan LNP, iyonlaşabilir katyonik lipidleri, doğal fosfolipidleri, kolesterolü ve polietilen glikolü (PEG) içerir. ABD Gıda ve İlaç İdaresi tarafından onaylanan çeşitli RNA aşıları ve tedavileri (siRNA ve mRNA), LNP dağıtım sistemlerine dayanmaktadır.
Yaohai Bio-Pharma, RNA için Tek Noktadan Çözüm Sunuyor
Özel Teslimatlar
|
sınıf
|
Teslim
|
Özellikler
|
Uygulamalar
|
|
GMP dışı
|
İlaç Maddesi, mRNA
|
0.1~10 mg (mRNA)
|
Hücre transfeksiyonu, Analitik yöntem geliştirme, Stabilite öncesi çalışmalar, Formülasyon geliştirme gibi klinik öncesi araştırmalar
|
|
İlaç Ürünü, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilite
|
İlaç Maddesi, mRNA
|
10mg~70 gr
|
Araştırmaya yönelik yeni ilaç (IND), Klinik deneme izni (CTA), Klinik deneme tedariki, Biyolojik lisans başvurusu (BLA), Ticari tedarik
|
|
İlaç Ürünü, LNP-mRNA
|
5000 şişe veya önceden doldurulmuş şırınga/kartuş
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
YOK HAYIR
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
