Aşağı Akım Süreç (DSP) Geliştirme'nin Önemi
Tüm fermantasyon suyu, hedef protein veya plazmid yanı sıra ürün- ve süreç-ile ilgili kirlilikler içerir, örneğin, agregaclar, mikrobiyal hücre substratları, Ana Makine Proteinleri (HCP), Ana Makine DNA'sı (HCD), endotoksin ve antibiyotikler.
Bu nedenle, belirli kirlilikleri kaldırmak ve yüksek derecede temiz ve kaliteli ilaç maddesi üretmek için etkili bir DSP, temizleme süreci tasarlamak vitaldir. Ayrıca, temizleme sürecinin iyileştirilmesi ürün geri kazanımını artırmaya, maliyetleri düşürmeye ve sürecin ölçeklenebilirliğini ve tekrarlanabilirliğini geliştirmeye yardımcı olabilir.
Anahtar Kelimeler: süreç geliştirme, iyileştirme ve doğrulama, temizleme süreci, kromatografi, kirliliklerin kaldırılması, HCP kaldırma, HCD eliminasyonu, endotoksin kaldırma, protein denatürasyonu ve yeniden katlanması, VLP montajı, konjüksiyon
Uygulama: Biyo farmasevtik endüstri, insan ilaçları, hayvan ilaçları, aşı, yeniden yapılanmış büyük molekül biyolojikler, yeniden yapılanmış biyolojikler, biyolojik reaktif
Yaohai Bio-Pharma'nın DSP Çözümleri
Karma matrislerden hedef proteinleri veya plazmitleri izole etmek için akış aşağısı temizleme sürecini geliştirmek ve optimize etmek konusunda geniş deneyimimiz bulunmaktadır. Biyolojiklerin temizlenmesi için uygun farklı türde birim işlemler bulunmaktadır, bunlar merkezileştirme, filtreleme, homojenleştirme, alkalit lizis, süperfiltreleme, birleşim, protein bozulması ve yeniden katlanması, kromatografi vb. içerir.
Mevcut temizleme geliştirme hizmetlerimiz şunları içerir:
- Hücre veya süpernatant toplamadan son aktif maddeye kadar tüm temizleme sürecin gelişimi.
- Ürünle ve süreçle ilgili kirletici maddeler temelinde temizleme sürecinin optimizasyonu ürün kalitesini ve güvenliğini artırmak için, örneğin, HCP, HCD, endotoxin.
- Bir veya daha fazla birim işlemi içindeki ana parametrelerin tanımlanması ve optimize edilmesi, hücre lizesi, teğetsel akış filtrelemesi, rezin ekranlaması, kromatografi, protein denatürasyonu ve yeniden katlanması vb. içerir.
- Süreç optimizasyonu kalite, verimlilik, geri kazanım, maliyet ve ölçeklenebilirlik açısından yapılır.
- Aşağı akım temizleme sürecinin doğrulanması.
- Risk tabanlı parametre aralığı değerlendirmesi ve süreç modellemesinde Deney Tasarımı (DoE).
Hizmet Ayrıntıları
Standartlaştırılmış protein veya plazmid temizleme platformları, birden fazla ilkel temizleme aşaması ve 4'ten az kromatografi adımı, yakalamayı, ara temizlemeyi ve pürüzlülemeyi içerir.
| Hizmet Ayrıntıları |
Birim İşlemler |
Parametreler |
| İlkel Temizleme |
Çevirgenleme |
Dönüş Hızı, Süre |
| Yüksek Basınçlu Homojenleştirme |
Toplam Katı İçerik, Basınç, Döngüler |
| Sürekli Alkalin Liyzis |
Yeniden Asılırlık Kazanan Hücreler ile Liyzis Çözeltisi Oranı, Liyzis Süresi |
| Tangansiyel Akış Filtrelemesi |
Membran Malzemesi ve Delik Boyutu, Besin Akış Hızı Transmembran Basıncı (TMP), Filtrat Hacmi ile Membran Alanı Oranı |
| Birikim |
Birikicinin Türü ve Konsantrasyonu, Eklenti, pH, Sıcaklık, Zaman |
| Bozunma ve Yeniden Katılama |
Dahil Edici Vücut Proteinleri Çözünürleştirme |
Bozucu Madde Konsantrasyonu (örn., Ure, Guanidin HCl, Güçlü İyonik Deterjan), Deterjanlar (örn., Sodium dodecyl sulfate, SDS), Redüksiyon Ajanları (örn., Dithiothreitol, DTT), Chelating Ajanlar (Etylenediaminetetraasetik asit, EDTA), Sıcaklık, Zaman |
| Protein yeniden katlanma |
Yeniden Katlanma Yöntemleri (seçme, diyáliz veya SEC yeniden katlanma), Protein Konsantrasyonları, Tamponlar, pH, Sıcaklık, Zaman, Oksidasyon ve Redüksiyon Ajanları (örn., Gliyatin, GSH/Oksidasyon Gliyati, GSSH, DTT/GSSH, Sistein/Sistin), Küçük Molekül Eklentileri (L-arginin, Ure, Guanidin/HCl ve Şeffaflaştırıcılar) |
| Kapturma, Ara Katılım ve Son Temizleme |
AC (Afinite Kromatografisi) |
Birden Fazla Tip Kromatografi Çamır/Sütun (örn., AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Sütun Uzunluğu ve Çapı, Tampon Bileşimi, Enjeksiyon Hacmi, Akış Fazı Bileşimi (Sabitlenme ve Çözülme), pH, Akış Hızı, Bağlama, Yıkama ve Elüsyon Koşulları. |
| IEX (Anjon veya Katyon Değişim Kromatografisi) |
| HIC (Hidrofob Etkileşim Kromatografisi) |
| Desaltaj ve/veya boyutsal hariç tutma kromatografisi (SEC) |
| RPC (Ters Faz Kromatografisi) |
| MMC, Karışık Mod Kromatografisi |
Durum İncelemesi
1 numaralı vaka
Protein safliǧi oranını %85'ten %90'a çıkarmak için ve kromatografi adımlarını azaltmak amacıyla akış süreçlerini geliştirmek ve optimize etmekle görevlendirildik.
Yaohai, hedef protein olan bir bakteriyel alerji için 3 kromatografi aşamasıyla dayanıklı ve ölçeklenebilir bir temizleme süreci sundu. Ve son saflik oranı %95'e ulaştı.
2 numaralı vaka
Yaohai, virus benzeri parçacık (VLP) ašığı için endotoksin kaldırma süreçlerini optimize etmek üzere müşteri tarafından atanmıĢtır.
Takımımız, kromatografi parametrelerini optimize etti ve %98 saflik ve mg başına 12.8EU endotoksin artığıyla bir ilac maddesi hazırladı.
Deneyimlerimiz
- Rekombinant alt birim ašıkları, VLP'ler, hormonlar (insülin, GLP-1, büyüme hormonu), sitedonlar (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), büyüme faktörleri (EGF, FGF, NGF), nanovucaller/tedavi edici tek-domän vucaller (sdAbs), enzimler vb. gibi çeşitli büyük moleküllerin geliştirilmesi ve üretiminde yer aldık.
Ekipman
Çeşitli kromatografi yöntemlerinin uygulanmasında endüstri öncüleri olan AKTA Pure, AKTA Avant ve Hazırlık HPLC sistemlerini kullanıyoruz. Bu yöntemler arasında afinite, iyon değiştirme, hidrofob etkileşim, ters faz ve boyutsal hariç tutma kromatografisi yer almaktadır.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
