N-glikosilasyon bölgesinin doluluğu, glikoproteinlerin fizyolojik bir özelliğidir ve esas olarak N-glikan üretir. Yaohai Bio-Pharma'nın N-glikosilasyon sahası doluluk analizi hizmeti, Sıvı Kromatografi-Elektrosprey İyonizasyon Kütle Spektrometresi-Kütle Spektrometresi (LC-ESI-MS/MS) kullanılarak sindirim, salım, zenginleştirme ve analiz yoluyla gerçekleştirilir.
Rekombinant Alt Birim Aşılar, Nanokorlar/VHH'ler/ Tek Alanlı Antikorlar (sdAb'ler), Antikor Parçaları, Hormonlar/Peptitler, Sitokinler, Büyüme Faktörleri (GF), Enzimler, Kolajenler dahil olmak üzere çeşitli büyük moleküllerin Protein Yapısal Karakterizasyonunda yer aldık. vesaire.
N-glikosilasyon Sahasının Kullanımına İlişkin Düzenleyici Gereksinimler
ICH Q6B kılavuzuna göre “glikoproteinler için karbonhidrat içeriği (nötr şekerler, amino şekerler ve sialik asitler) belirlenir. Ayrıca karbonhidrat zincirlerinin yapısı, oligosakkarit modeli (anten profili) ve polipeptit zincirinin glikosilasyon bölgesi/bölgeleri mümkün olan en iyi düzeyde analiz edilir."
Analitik metod
| Analiz |
Yöntemler |
| N-glikosilasyon bölgesi doluluğu |
Deglikozilaz ve proteaz sindiriminden sonra LC-MS |
Prosedürler
1. Küçük peptit fragmanları oluşturmak için proteinlerin protein sindirimi.
2. Endoglikosidaz H veya PNGaz F kullanılarak N-glikan salınımı. Endoglikosidaz H, N-bağlı glikanların çekirdeğindeki iki GlcNAc kalıntısı arasındaki bağı böler; PNGaz F ise GlcNAc ve Asn arasındaki bağı keserek tüm GlcNAc'yi serbest bırakan bir glikoamidazdır. şeker zinciri ve 1-Da'lık kütle artışı ile Asn'nin Asp'ye dönüştürülmesi.
3. HILIC (Hidrofilik Etkileşim Sıvı Kromatografisi) Yoluyla N-glikopeptid Zenginleştirme
Şekil 4. LC-ESI-MS/MS kullanılarak N-bağlı glikosilasyon bölgesi doluluğunun analizi.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
YOK HAYIR
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
