Yukarı Akım Süreç Geliştirmenin Önemi
Yukarı akım süreç (USP), aynı zamanda fermantasyon süreci olarak da bilinir ve yukarı akım biyoişleminin başlangıç fazları arasındadır. Mikrobiyal fermantasyon süreci, yüksek yoğunlukta hücre kültürleri ve dış gen ifadesi için kritik olup, doğrudan biyolojik ürünlerin verimini ve maliyetini etkiler.
Biyolojik ürünlerin geliştirilmesinin erken aşamalarında (ön-klinik veya 1/2. aşama), orta düzeyde verim elde edilmesi ve tüm ürün kalite standartlarını karşılayan ölçeklenebilir hayvan serumsuz süreçler geliştirmek üzerine odaklanılır.
Geç aşamalarda (3. aşama veya ticari), verim, dayanıklılık, ölçeklenebilirlik ve tekrarlanabilirlik üzerinde odaklanılır ve maliyet-etkin bir süreç oluşturulur. Bu sorunlara ilişkin faaliyetler, süreç karakterizasyonu ve süreç doğrulama çalışmalarıdır. Bunların yanı sıra, tasarım deneyleri (DoE) araçları ve kalite tasarımına göre (QbD) yaklaşımları genellikle uygulanır.
Anahtar kelimeler: süreç geliştirmesi, optimizasyonu ve doğrulaması, fermantasyon süreci, mikrobiyal hücre fermantasyonu, bakteri fermantasyonu, mantar fermantasyonu, yüksek yoğunluklu fermantasyon, mühendislikli ırk fermantasyonu
Uygulama: Biyo farmasevtik endüstri, insan ilaçları, hayvan ilaçları, aşı, yeniden yapılanmış büyük molekül biyolojikler, yeniden yapılanmış biyolojikler, biyolojik reaktif
Yaohai Bio-Pharma'nın USP Çözümleri
10 yılı aşkın mikrobiyal fermantasyon deneyimlerinden faydalanılarak, Yaohai Bio-Pharma fermantasyon süreçleriyle ilgili ortaya çıkan zorlukları çözmek için uzman kadrosu bulunmaktadır. Hızlıca yüksek yoğunluklu fermantasyon stratejileri geliştirebiliriz. Escherichia coli (E. coli) periplazmik salgı, hücre içi çözünür veya eklem cisim ifadesi ve Mantar dışsal veya hücre içi ifade.
Mevcut genel fermantasyon geliştirme hizmetlerimiz şunları içerir:
- Besilen toplu kitle modunda 7L küçük ölçekde gerçekleştirilen fermantasyon süreç tasarımı
- 7L fermantörlerde üç parti süreç doğrulaması
- 30L/70L'ye kadar olan ara bir süreç ölçeklendirilmesi
İstenen verim veya orana ulaşmak için One-Time-A-Factor (OTAF) veya Design-of-experiments (DoE) yöntemlerini kullanarak çok parametreli eniyilemeyi esnek bir şekilde gerçekleştirebiliriz.
Anahtar fermantasyon parametreleri şunlardır:
Hayvansız fermantasyon ortamı bileşimi
Antibiyotik içermemesi veya içermesi, Başlangıç kültürü hacmi
Büyüme sıcaklığı, pH, Çözünmüş oksijen (DO) seviyesi
Besleme modu (örn., fed-batch)
Indüktör konsantrasyonu (örn., IPTG, metanol), Indürasyon noktası (hücre nemli ağırlığı/OD600),
Indürasyon sıcaklığı, Indürasyon süresi
vb.
Hizmet Ayrıntıları
| Hizmetler |
İşlem Akışı |
| Şake Flasında Yetiştirme (500 mL) |
Hayvan serbesi olmayan ortam hazırlığı → Mikrobiyal tohum yetiştirme → Şekerde yetiştirme → Indüksiyon → Hasat |
| Fermenteörde Yetiştirme (7 L) |
Hayvan serbesi olmayan ortam hazırlığı → Mikrobiyal tohum yetiştirme → 7L bioreaktörde yüksek yoğunluklu hücre fermantasyonu → Indüksiyon → Hasat |
| Proteinler/Peptidlerin Kalite Kontrolü |
İçsel Çözünür Ifade Ön İşleme: Mikrobiyal hücrelerin hasadı ve yeniden süspansiyonu → Ultrasonik parçalama → Hücre artıklarının kaldırılması → Ilkel ekstrakt Inklüzyon vucudu ifadesi: Mikrobiyal hücrelerin hasadı ve yeniden süspansiyonu → Inklüzyon vucudu hazırlığı → Ilkel ekstrakt Dışsal Çözünür İfade: Kültür süpernatantının toplanması → Konsantrasyon ve tampon değişimi → Ilkel ekstrakt Kalite analizi Ilkel ekstrakt örneği olarak → Hedef proteinin SDS PAGE veya Western blotting (WB) ile analizi |
| Plazmidlerin Kalite Kontrolü |
Ön Tedavi ve Kalite Analizi Plazmid çıkarma → Agaroz jel elektroforezi ile DNA analizi |
Durum İncelemesi
Müşterimiz tarafından bize hedef polipeptid hormon verimini 8 g/L'den 10 g/L'ye artırmak için görevlendirildik.
DoE araçlarındaki Tam Faktöriyel Tasarım ve Yanıt Yüzeyi Tasarımı temelinde, anafermentasyon parametrelerini hızlı bir şekilde tanıdık ve optimize ettik. Optimize edilmiş yüksek hücre yoğunluğundaki anafermentasyon süreci altında ifade seviyesi 10 g/L'ye yükseldi.
Deneyimlerimiz
- Çeşitli türlerdeki mikrobiyal evsahiplerle çalıştık, örneğin, E.coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink ırkı1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) ve Hansenula polymorpha (H. polymorpha) .
- Tecrübeliyız E. coli periplazmik sekrezyon, çözünebilir ve inklüzyon vucudu ifadesi ile ilgili deneyimlerimiz var, ayrıca Yeast intraselüler veya ekstraselüler ifade de dahil edilmiştir. Inklüzyon vucudu verimi 10g/L'ye kadar olabilirken, çözünebilir protein verimi 0.5 ila 15g/L arasında değişmektedir.
- Çeşitli büyük moleküllerin geliştirilmesi ve üretimiyle ilgilenmiştik, bu da rekombinant alt birim aşıları, virüs-benzeri parçacıklar (VLP'ler), hormonlar (insülin, GLP-1, büyüme hormonu), sitokinler (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), büyüme faktörleri (EGF, FGF, NGF), nanovücutlar/tek-domen antikorlar (sdAbs), enzimler vb. içerir.
- Ekipman
7L*16 Fermentasyon Sistemi
Cedex Bio Analizörü, Bi Süreç analizörü
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
