Yukarı Yönde Süreç Geliştirmenin Önemi
Fermantasyon işlemi olarak da bilinen yukarı akış işlemi (USP), yukarı akış biyoişlemenin ilk aşamalarından biridir. Mikrobiyal fermantasyon süreci, biyolojik verimi ve maliyeti doğrudan etkileyen yüksek yoğunluklu hücre kültürü ve eksojen gen ekspresyonu için çok önemlidir.
Biyolojik gelişmenin ilk aşamalarında (klinik öncesi veya faz 1/2), odak noktası, orta düzeyde verime sahip, ölçeklenebilir, hayvan içermeyen süreçler geliştirmek ve tüm ürün kalite standartlarını karşılamaktır.
Son aşamalarda (3. aşama veya ticari) verim, sağlamlık, ölçeklenebilirlik ve tekrarlanabilirliğe odaklanarak uygun maliyetli bir süreç oluşturacağız. Bu konuları ele alan faaliyetler süreç karakterizasyonu ve süreç doğrulama çalışmalarıdır. Bu arada, tasarım yoluyla kalite (QbD) ve deney tasarımı (DoE) araçları genellikle uygulanır.
Anahtar Kelimeler: süreç geliştirme, optimizasyon ve doğrulama, fermantasyon süreci, mikrobiyal hücre fermantasyonu, bakteri fermantasyonu, maya fermantasyonu, yüksek yoğunluklu fermantasyon, tasarlanmış suş fermantasyonu
Uygulama: Biyofarmasötik endüstrisi, insan ilacı, hayvan ilacı, aşı, rekombinant büyük molekül biyolojikleri, rekombinant biyolojikler, biyolojik reaktif
Yaohai Bio-Pharma'nın USP Çözümleri
10 yılı aşkın mikrobiyal fermantasyon deneyiminden yararlanan Yaohai Bio-Pharma, fermantasyon süreci zorluklarını çözmeye yardımcı olacak uzmanlığa sahiptir. Yüksek yoğunluklu fermantasyon stratejilerini hızla oluşturabiliriz. Escherichia coli (E.coli) periplazmik sekresyon, hücre içi çözünür veya inklüzyon cisimciği ekspresyonu ve Mayanın hücre dışı veya hücre içi ekspresyonu.
Mevcut genel fermantasyon geliştirme hizmetlerimiz şunları içerir:
- Beslemeli kesikli modda 7L'lik küçük bir ölçekte gerçekleştirilen fermantasyon proses tasarımı
- 7L fermentörlerde üç partili proses doğrulaması
- 30L/70L'ye kadar bir ara proses ölçeği
İstenilen verimi veya oranı karşılamak için Tek Seferlik Bir Faktör (OTAF) veya Deney Tasarımı (DoE) kullanarak çok parametreli optimizasyonu esnek bir şekilde gerçekleştirebiliriz.
Temel fermantasyon parametreleri aşağıdaki gibi listelenmiştir:
Hayvan içermeyen fermantasyon ortamı bileşimleri
Antibiyotiksiz veya değil, İnokulum hacmi
Büyüme sıcaklığı, pH, Çözünmüş oksijen (DO) seviyesi
Besleme modu (örneğin, toplu besleme)
İndükleyici konsantrasyonu (örn. IPTG, metanol), İndüksiyon noktası (hücre ıslak ağırlığı/OD600),
İndüksiyon sıcaklığı, İndüksiyon süresi
vb.
Servis Detayları
| Hizmetler |
Süreç akışı |
| Çalkalama Şişesinde Yetiştirme(500 mL) |
Hayvansız ortam hazırlama → Mikrobiyal tohum yetiştirme → Çalkalayıcıda yetiştirme → İndüksiyon → Hasat |
| Fermentörde Yetiştirme(7 L) |
Hayvansız ortam hazırlama → Mikrobiyal tohumun yetiştirilmesi → 7L biyoreaktörde yüksek yoğunluklu hücre fermantasyonu → İndüksiyon → Hasat |
| Proteinlerin/Peptitlerin Kalite Kontrolü |
Ön Muamele Hücre içi çözünür ekspresyon: Mikrobiyal hücrelerin toplanması ve yeniden süspansiyonu → Ultrasonik kırma → Hücre döküntülerinin uzaklaştırılması → Ham ekstrakt İnklüzyon cisimciği ekspresyonu: Mikrobiyal hücrelerin toplanması ve yeniden süspansiyonu → Ultrasonik kırma → inklüzyon gövdesi hazırlığı → Ham ekstrakt Hücre dışı çözünür ekspresyon: Kültür süpernatanının toplanması → Konsantrasyon ve tampon değişim → Ham ekstrakt Kalite analizi Örnek olarak ham ekstrakt → SDS PAGE veya Western blotlama (WB) ile hedef protein analizi |
| Plazmitlerin Kalite Kontrolü |
Ön Muamele ve Kalite AnaliziPlazmid ekstraksiyonu → Agaroz jel elektroforezi ile DNA analizi |
Örnek olay
Hedef polipeptit hormon verimini 8 g/L'den 10 g/L'ye çıkarmak için müşterimiz tarafından görevlendirildik.
DoE araçlarındaki Tam Faktöriyel Tasarım ve Yanıt Yüzey Tasarımını temel alarak temel fermantasyon parametrelerini hızlı bir şekilde tanıdık ve optimize ettik. Optimize edilmiş yüksek hücre yoğunluklu fermantasyon işlemi altında ekspresyon seviyesi 10 g/L'ye yükseldi.
Deneyimlerimiz
- Çeşitli mikrobiyal konak türleri üzerinde çalıştık, örneğin: E.coli DH5a, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink suşu1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) ve Hansenula polymorpha (H. polymorpha).
- konusunda tecrübeliyiz E. coli periplazmik sekresyon, çözünebilir ve inklüzyon cisimciği ekspresyonunun yanı sıra Maya hücre içi veya hücre dışı ekspresyonu. İnklüzyon gövdesinin verimi 10 g/L'ye kadar çıkarken, çözünür protein verimi 0.5 ila 15 g/L arasında değişir.
- Rekombinant alt birim aşılar, virüs benzeri parçacıklar (VLP'ler), hormonlar (insülin, GLP-1, büyüme hormonu), sitokinler (İnterlökin-2/IL-2, IL) dahil olmak üzere çeşitli büyük moleküllerin geliştirilmesinde ve üretiminde yer aldık. -15, IL-21), büyüme faktörleri (EGF, FGF, NGF), nanokorlar/tek alanlı antikorlar (sdAb'ler), enzimler vb.
- Ekipman
7L*16 Fermantasyon Sistemi
Cedex Bio Analizörü, Biyoproses analizörü
TR
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
YOK HAYIR
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
