Sıvı kromatografi-kesim spektrometri (LC-MS) temelli peptid haritalama verileri, yerel ve rekombinant proteinlerin birincil ve daha yüksek mertebe yapısı hakkında büyük miktarda bilgi sağlayacak, amino asit dizisi kaplaması, sonraki çevrim değişimleri (PTMs, örneğin glikozlendirme, oksidasyon, deamidasyon), disülfür bağı vb. dahil olmak üzere.
Yaohai Bio-Pharma hedef proteininiz için LC-MS ile peptid haritalama analizi hizmetleri sunmaktadır, bu da protein yapısı üzerine olan araştırmanızı hızlandırır.
Çeşitli büyük moleküllerin Protein Yapısal Karakterizasyonu konusunda çalıştık, bunların arasında Rekombinant Alt Birim Aşılar, Nanovüçgenler/VHH'ler/ Tek-domän Antikorlar (sdAbs), Antikor Parçaları, Hormonlar/Peptidler, Sito kinler, Büyüme Faktörleri (GF), Enzimler, Kolajenler vb. bulunur.
Peptid Haritalaması İçin Düzenleyici Gereksinimler
ICHQ6B rehberi, "Ürünün seçici olarak ayrıştırılması uygun enzimler veya kimyasallar kullanılarak gerçekleştirilir ve elde edilen peptid parçaları HPLC veya diğer uygun analitik prosedürlerle analiz edilir. Peptid parçaları mümkün olduğunca amino asit bileşimi analizi, N-terminallerde dizileme veya kütle spektrometrisi (MS) gibi teknikler kullanılarak tanımlanmalıdır. Etkin maddenin veya ilacın (DP) peptid haritalandırılması, uygun şekilde doğrulanmış bir yöntem kullanılarak partiyi serbest bırakmak için istenen ürün yapısını onaylamak amacıyla sıklıkla kullanılan bir yöntemdir."
Analitik Yöntemler
| Analiz |
Yöntemler |
| Peptid Haritalama |
Proteaz Ayrıştırma ve Sıvı Kromatografi-Kütle Spektrometrisi (LC-MS) |
Analitik Prosedür
1. Redüksiyon ve Alkilasyon
Amacımız, disülfid köprülerini azaltmak ve oluşan serbest tiyol grubunu bloklamaktır. Disülfid köprülerinin azaltılması, protei yapılarını açmaya yardımcı olur ki bu da proteolitik sindirimleri daha verimli hale getirir. Bu adım, zincirler arasında disülfid köprüleri olan çoklu zincirli proteinlerde (örneğin monoklonal antikorlar, mAbs) zincirler arasındaki köprüleri de bozar.
2. Enzimleri Kullanarak Proteini Sindirme
Amacımız, proteini peptidlere ayırmaktır. Enzimleri, proteinin teorik dizisine ve enzimler tarafından proteinin teorik olarak nasıl sindirileceğine dair bilgiye göre seçiyoruz. Bu şekilde enzimleri seçerek, en iyi peptid haritalama analizi elde edilmelidir.
3. Sindirilmiş Peptitlerin Analizi Çevrimiçi Ters Faz-Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi ile (RP-HPLC) Morfolojik (UV) ve Elektrospray-Kütlesel Spektrometri Algılamalı (LC/ES-MS).
Polariteye dayalı peptit ayrımı LC kullanılarak (ters faz-LC)
Peptid LC sütunundan elüasyon ederken, kütle spektrometresi, bize sekansı belirlememizi sağlayan kütle bilgisi ve parçalanma iyonu bilgisini oluşturacaktır. Sekans bilgisini peptid kimliğini doğrulamak ve birincil bilgi sağlamak için kullanırız.
LC sütunundan kütle spektrometresi kaynağına giren peptitlerden de parçalanma bilgisini oluşturabiliriz. Çalışmanın gereksinimlerine bağlı olarak, bu ya seçici LC-MS/MS veya seçimsiz olup, bunun tandem MS'nin bir biçimi olarak kabul edilebileceği durumdur.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
