Sıvı Kromatografi-Kütle Spektrometresi (LC-MS) bazlı peptit haritalama verileri, amino asit dizisi kapsamı, translasyon sonrası modifikasyonlar (PTM'ler, örneğin glikosilasyon) dahil olmak üzere doğal ve rekombinant proteinlerin birincil ve daha yüksek dereceli yapısı hakkında büyük miktarda bilgi sağlayacaktır. , oksidasyon, deamidasyon), disülfit bağları vb.
Yaohai Bio-Pharma, protein yapısı hakkındaki araştırmalarınızı hızlandırmak için LC-MS ile hedef proteininiz için peptit haritalama analiz hizmetleri sunar.
Rekombinant Alt Birim Aşılar, Nanokorlar/VHH'ler/ Tek Alanlı Antikorlar (sdAb'ler), Antikor Parçaları, Hormonlar/Peptitler, Sitokinler, Büyüme Faktörleri (GF), Enzimler, Kolajenler dahil olmak üzere çeşitli büyük moleküllerin Protein Yapısal Karakterizasyonunda yer aldık. vesaire.
Peptid Haritalamaya İlişkin Düzenleyici Gereksinimler
ICHQ6B kılavuzu şunu önermektedir: "Ürünün ayrı peptitlere seçici parçalanması, uygun enzimler veya kimyasallar kullanılarak gerçekleştirilir ve elde edilen peptit parçaları, HPLC veya diğer uygun analitik prosedürlerle analiz edilir. Peptit fragmanları, amino asit kompozisyon analizi, N-terminal dizilimi veya kütle spektrometrisi (MS) gibi teknikler kullanılarak mümkün olduğunca tanımlanmalıdır. Aktif maddenin veya ilaç ürününün (DP) uygun şekilde valide edilmiş bir yöntem kullanılarak peptid haritalandırılması, seri salımı için istenen ürün yapısını doğrulamak için sıklıkla kullanılan bir yöntemdir."
Analitik metodlar
| Analiz |
Yöntemler |
| Peptit Haritalaması |
Proteaz Sindirimi ve Sıvı Kromatografisi-Kütle Spektrometresi (LC-MS) |
Analitik prosedür
1. İndirgeme ve Alkilasyon
Amaç disülfit köprülerini azaltmak ve üretilen serbest tiyolleri bloke etmektir. Disülfür köprülerinin azaltılması, protein yapısının açılmasına yardımcı olur ve bu da proteolitik sindirimin daha verimli olmasını sağlar. Bu adım aynı zamanda zincirleri birbirine bağlayan disülfür köprülerine sahip olan çok zincirli proteinler (örn. monoklonal antikorlar, mAb'ler) durumunda zincirler arasındaki köprüleri de kıracaktır.
2. Enzimler Kullanılarak Proteinin Sindirimi
Amaç proteini peptidlere parçalamaktır. Enzimleri, proteinin teorik dizisine ve proteinin enzimler tarafından teorik sindirimine ilişkin bilgiye dayanarak seçtik. Enzimlerin bu şekilde seçilmesi, en iyi peptit haritalama analizi ile sonuçlanmalıdır.
3. Sindirilmiş Peptitlerin Analizi Ultraviyole (UV) ve Elektrosprey-Kütle Spektrometrik Algılama (LC/ES-MS) ile Çevrimiçi Ters Fazlı Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisinin Kullanılması.
LC (ters faz-LC) kullanılarak polariteye dayalı peptit ayrımı
Peptid LC kolonundan elüt olurken, kütle spektrometresi fragman iyon bilgisi ile birlikte kütle bilgisi üretecek ve bu da dizi bilgisini belirlememize olanak tanıyacaktır. Peptit kimliğini doğrulamak ve birincil bilgi sağlamak için dizi bilgisini kullanırız.
Ayrıca LC kolonundan kütle spektrometre kaynağına girdiklerinde peptitlerden parçalanma bilgisi de üretebiliriz. Çalışmanın gerekliliklerine bağlı olarak bu ya seçici LC-MS/MS'dir ya da seçici değildir ve tandem MS'in bir biçimi olarak düşünülebilir.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
YOK HAYIR
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
