Dairesel mRNA (circRNA), gen veya protein fonksiyonlarının araştırılmasında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu arada, mRNA'ya benzer profilaktik ve terapötik biyolojiklerin geliştirilmesinde de popülerdir.
Yaohai Bio-Pharma, dizi tasarımı ve optimizasyonu, in vitro transkripsiyon (IVT), daireselleştirme/siklizasyon, saflaştırma ve lipid nanoparçacık (LNP) kapsülleme gibi yüksek kaliteli RNA sağlamak için bir dizi circRNA sentez teknolojisi oluşturmuştur. Tüm ürünler sıkı kalite kontrol (QC) standartları kapsamında piyasaya sürülmektedir.
Doğrusal mRNA ile karşılaştırıldığında, dairesel RNA (circRNA) yapı olarak daha stabildir ve mevcut nükleik asit ilaç araştırmalarında önemli bir sıcak noktadır. Bulaşıcı hastalıklara yönelik profilaktik aşılar, terapötik onkoloji aşıları, terapötik onkoloji ilaçları, protein replasman tedavisi, rejeneratif tıp, hücre ve gen terapisi (CGT) dahil olmak üzere, ister kodlayıcı circRNA ister kodlayıcı olmayan circRNA olsun, farklı alanlarda geniş bir uygulama yelpazesine sahiptir. , moleküler sünger rolü ve RNA aptameri.
Süreç | İsteğe Bağlı Hizmet | Servis Detayları | Teslimat Süresi (gün) |
circRNA Dizi Tasarımı ve Optimizasyonu | Kodlama Dizilerinin Tasarımı ve Optimizasyonu | CDS Kodon Optimizasyonu | 1 |
Kodlamayan Dizilerin Tasarımı ve Optimizasyonu | İntron ve Ekson Dizisi, Homolog Kol ve Ara Parça Tasarımı ve Optimizasyonu | 1-2 | |
Dairesel Plazmit Hazırlama | Gen Sentezi | Gen Sentezi (Üçüncü taraf) | 7-10 |
Plazmid Amplifikasyonu | Plazmid Amplifikasyonu | 2 | |
Plazmid Ekstraksiyonu | |||
Doğrusallaştırılmış Plazmit Hazırlama | Plazmid Doğrusallaştırma ve Saflaştırma | Plazmid Doğrusallaştırma | 1 |
Doğrusallaştırma DNA Saflaştırması | |||
İn Vitro Transkripsiyon ve Siklizasyon | İn Vitro Transkripsiyon ve Siklizasyon | İn Vitro Transkripsiyon ve Siklizasyon Reaksiyonları | 1-2 |
RNaz R Sindirimi | |||
Optimizasyon-isteğe bağlı | Reaksiyon Bileşimi, Zaman Optimizasyonu | 2-5 | |
circRNA Saflaştırma | Geleneksel Arıtma Yöntemi | Lityum Klorür Yağışı | 1 |
Manyetik Boncuk Arıtma | 1 | ||
Son Derece Saf circRNA Saflaştırması | Hazırlayıcı Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) | 1-2 | |
Tampon Değişimi | Ultrafiltrasyon | 1 | |
circRNA Liyofilizasyonu | Örnek Dolum | Dolgu | 2-3 |
Liyofilizasyon | ön dondurma | ||
Birincil Kurutma (Süblimasyon) | |||
İkincil Kurutma (Desorpsiyon) | |||
circRNA-LNP Kapsülleme | LNP Kapsülleme | Malzeme ve Sıvı Ön Arıtma | 2 |
Mikroakışkan Cihaz Karıştırma | |||
Tampon Değişimi | Teğetsel Akış Filtreleme | 1 | |
Sterilizasyon | Süzme | ||
Plazmid DNA'nın Kalite Kontrolü | Konsantrasyon/saflık | Ultraviyole (UV) Spektrofotometri | 1-2 |
Plazmid konformasyonu | Agaroz Jel Elektroforezi (AGE) | ||
Kapiler Elektroforez (CE)-Opsiyonel | |||
Plazmid tanımlama | Kısıtlama Enzim Tanımlaması/AGE | ||
circRNA'nın Kalite Kontrolü | Konsantrasyon/saflık | Ultraviyole (UV) Spektrofotometri | - |
Saflık | Agaroz Jel Elektroforezi (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-isteğe bağlı | 1 | ||
circRNA-LNP'nin Kalite Kontrolü | Kapsülleme Verimliliği | RiboGreen Yöntemi | 1 |
Parçacık boyutu | Dinamik Işık Saçılımı (DLS) | 1 | |
Polidispersite indeksi | Dinamik Işık Saçılımı (DLS) | 1 | |
Zeta Potansiyeli | Dinamik Işık Saçılımı (DLS) | 1 | |
Hücre bazlı Potansiyel Testi | Hücre Transfeksiyonu | Hücre kaplama, hücre transfeksiyonu | 4 |
Hedef Protein Tespiti | Floresan gözlemi, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Geliştirilmiş yeşil floresan protein circRNA'yı (eGFP circRNA), mCherry circRNA'yı, lusiferaz circRNA'yı 293T hücrelerine transfekte ettik ve floresan, ışıldayan veya renk sinyali, western blot (WB), enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA) yoluyla hedef proteini tespit ettik.
Yaohai Bio-Pharma'nın circRNA Örneklerinin Hücre Bazlı Potansiyel Testleri