İki adımlı enzymatik kaplama ile karşılaştırıldığında, tek adımlı ko-transkripsiyonel kaplama yöntemi süreç akışını önemli ölçüde azaltabilir. Yöntem sonuç odaklıdır ve in vitro transkripsiyon (IVT) reaksiyonuna kap analoglarının eklenmesini içerir. Kap analogları transkripsiyonun başlangıcında tanıtabilir ve transkripsiyon tamamlandığında kap yapılı mRNA elde edilebilir. Mevcut üçüncü nesil kap analogları ters kaplamayı önleyebilir ve doğrudan transkripsiyon ürününde Cap 1 yapısını ekleyebilir.
MRNA'nin vivo immunojenlik ve çeviri verimliliği konusundaki değerlendirmeler için, IVT süreci genellikle belirli türde değiştirilmiş NTP'leri kullanır ve yaygın değiştirilmiş nükleotitler pseudouridin (Ψ), N1-metil-pseudouridin (N1Ψ) ve 5-metil-sitozin (5mC)'dir.
Şema: mRNA Ko-transkripsiyonel ve Kaplama Reaksiyonu Diyagramı
Hizmet Ayrıntıları
HİZMET |
Hizmet Ayrıntıları |
Teslimat Süresi (iş günü) |
Ko-transkripsiyonel kaplama |
Doksan dışı transkripsiyonel yanıt (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Nükleotid değişiklikleri (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA şablonu kaldırılması (DNase I) |
IVT koşullarının optimizasyonu - isteğe bağlı |
Reaksiyon bileşeni tasarımı ve optimizasyonu |
3-7 |
Özelliklerimiz
- Çeşitli Nükleotid Modifikasyon Stratejileri
Birden fazla isteğe bağlı nükleotid değiştirme stratejisi protein ifadesini geliştirebilir.
- Optimize Edilmiş Reaksiyon Sistemi
Yüksek bir transkripsiyon oranı ve yüksek kaplama verimliliği elde edin.
95%’ten daha yüksek bir kapatma oranı elde edin.
- RNase Üzerinde Strik Kontrol
Deney ortamında ve tüketime uygun malzemelerdeki RNaseyi strik olarak kontrol etmek suretiyle mRNA’nın bozunmasını etkili bir şekilde önleyin.
Durum İncelemesi
Yaohai Bio-Pharma, temiz kap analoglarını kullanarak Cap1 yapısını doğrudan ekleyen olgun bir eş-transkripsiyonel kapatma süreç platformu kurmuştur. Ters kapatmayı önlemek için standartlaştırılmış örnek ön işleme ve kapilli elektroforez (CE) algılaması ardından, artırılmış yeşil floresan protein (eGFP) mRNA’sının kapatma oranı %95’ten fazla olabilir.
eGFP mRNA’sının %95’ten fazla kapatma verimliliği
Eş-transkripsiyonel kapatma ile hazırlanan eGFP mRNA ve mCherry mRNA 293T hücrelerine ayrı ayrı transfekte edilir ve 48 saat sonra güçlü bir floresan sinyal gözlemlenir; bu da mRNA’nın 293T hücrelerinde etkin bir şekilde ifade edildiğini gösterir.
EGFP mRNA ve mCherry mRNA’nın 293T Hücrelerde İfade Edilmesi
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
