RNA öncüllerinin toplu hazırlanmasıyla ilgili olarak yaygın olarak kullanılan bir yöntem, in vitro transkripsiyondur (IVT). IVT reaksiyonu, şablon olarak T7 promotörünü içeren doğrusallaştırılmış plazmid DNA'yı kullanır ve T7 RNA polimerazın varlığında substrat olarak nükleosid trifosfatlar (NTP'ler) içeren bir RNA öncüsünü sentezler.
İn vitro siklizasyon yöntemleri arasında kimyasal ligasyon, enzimatik ligasyon ve permütasyonlu intron-ekson (PIE) yöntemi yer alır. Kimyasal ligasyon ve enzimatik ligasyon, daha kısa RNA'ların siklizasyonu için uygundur. Parça 100 nt'den büyük olduğunda siklizasyon oranı büyük ölçüde azalacaktır. Buna karşılık, PIE sistemine dayalı nükleaz yöntemi 8 kb'lik dizilerin siklizasyonunu başarabilir.
Guanozin trifosfatın (GTP) katalizi altında, PIE yapısı ekstra intron dizilerinin siklizasyonuna uğrar. Siklizasyon oranını artırmaya yönelik makul bir strateji ile birleştirilen Yaohai Bio-Pharma, %4'den fazla siklizasyon verimliliği ile 80 kb'ye kadar sekansların siklizasyonunu gerçekleştirebilir.
RNA'nın in vitro siklizasyon reaksiyonu şu şekilde ilerler:
RNA öncüsü, in vitro transkripsiyonla sentezlenir ve PIE bileşeni, circRNA'yı oluşturmak için GTP'nin katalizi altında kendi kendine birleştirmeyi tamamlar.
Hizmet Detayları
| Süreç |
Servis Detayları |
Teslimat Süresi (İş Günü) |
| İn vitro transkripsiyon ve dolaşım |
Reaksiyon sistemi onayı |
1-2 |
| İn vitro transkripsiyon ve siklizasyon reaksiyonları |
| RNaz R sindirimi |
| Reaksiyon optimizasyonu |
Reaksiyon bileşimi, zaman optimizasyonu |
2-5 |
Özelliklerimiz
- Titiz test tasarımı ve optimizasyonu
4 kb'ye kadar RNA siklizasyonu elde edilebilir.
- Yüksek siklizasyon verimliliği
Rasyonel bir dizi optimizasyon stratejisiyle %80'in üzerinde bir siklizasyon oranına ulaşılabilir.
Deney ortamında ve sarf malzemelerinde RNazların sıkı kontrolü sayesinde RNA bozunması etkili bir şekilde önlenir.
Örnek olay
CircRNA'nın in vitro siklizasyonu ve zenginleştirilmesi
PIE sistemini temel alan Yaohai Bio-Pharma, circRNA dizisini agaroz jel elektroforezi (AGE) ile %80'den fazla siklizasyon oranıyla optimize etmiştir. CircRNA'yı zenginleştirmek için RNaz R kullanıldığında, E-jel elektroforezi sonuçları doğrusal RNA öncülünün sindirildiğini ve daha fazla saflaştırmanın ardından çentikli circRNA'nın çoğunun çıkarılabildiğini gösterir. Saflaştırma çözümü Yaohai Bio-Pharma tarafından geliştirildi.
In vitro dolaşım ve circRNA'nın zenginleştirilmesi
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
YOK HAYIR
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
