İn vitro transkripsiyon (IVT) mRNA'sının hazırlanması sürecinde, T7 RNA polimeraz yardımıyla IVT için transkripsiyon şablonu olarak doğrusallaştırılmış plazmid DNA'ya ihtiyaç vardır. Yüksek kaliteli plazmit DNA, in vitro transkripsiyon için çok önemlidir.
Yaohai Bio-Pharma, olgun plazmid hazırlama hizmet platformunu temel alarak, verimli IVT transkripsiyonunu elde etmek için yüksek saflıkta ve yüksek standartta doğrusallaştırılmış bir plazmit DNA hazırlama hizmeti sunabilir.
Süreç | İsteğe Bağlı Hizmet | Servis Detayları | Teslimat Süresi (İş Günü) |
Dairesel plazmit hazırlanması | Gen sentezi | Gen sentezi (üçüncü taraf) | 7-10 |
Plazmid amplifikasyonu | Plazmid amplifikasyonu | 2 | |
Plazmid ekstraksiyonu | |||
Doğrusallaştırılmış plazmit hazırlama | Plazmid doğrusallaştırma ve saflaştırma | Plazmid doğrusallaştırma | 1 |
Doğrusallaştırma DNA saflaştırması | |||
Plazmid DNA kalite kontrolü | Konsantrasyon saflığı | Ultraviyole (UV) spektrofotometri | 1-2 |
Plazmid konformasyonu | Agaroz jel elektroforezi (AGE) | ||
Kapiler elektroforez (CE)-isteğe bağlı | |||
Plazmid tanımlama | Kısıtlama enzimi tanımlaması/AGE |
Doğrusallaştırma yöntemlerinin esnek seçimi
Yüksek geri kazanım oranlarına ulaşmak için DNA ekstraksiyon ve saflaştırma yöntemlerinin optimizasyonu.
Araştırma için %80'in üzerinde plazmit örneklerinin süper sarmal konformasyon oranına sahip sıkı proses kontrol standartları.
Deneysel ihtiyaçları karşılamak için yüksek standartta ve yüksek verimli plazmid hazırlama ve kalite kontrol hizmetleri.
Yaohai Bio-Pharma kataloğu mRNA_lusiferaz ürününü örnek olarak alırsak, transkripsiyon şablonu plazmit numunesi (araştırma derecesi), %90'dan fazla bir süperhelikal orana, %100'e yakın bir doğrusallaştırma oranına ve 1:200'e kadar müteakip bir transkripsiyon oranına sahiptir ( doğrusallaştırılmış plazmid DNA:mRNA).
Bir şablon olarak doğrusallaştırılmış bir plazmidin hazırlanması yoluyla elde edilen mRNA_lusiferaz, 293T hücrelerine transfekte edilir ve enzim-substrat reaksiyon aktivitesi, transfeksiyondan 24 saat sonra değerlendirilir.
Açıkça güçlü bir lusiferaz aktivite sinyali tespit edilebilir, yani lusiferaz proteini verimli bir şekilde eksprese edilir, bu da transkripsiyon şablonunun saflığının yüksek kaliteli mRNA hazırlığı gerekliliğini tam olarak karşılayabileceğini gösterir.
Süpersarmal Plazmid Oranı Testi
Lusiferaz mRNA İfadesinin İn Vitro Olarak Doğrulanması