Yaohai Bio-Pharma, RNA siklizasyonunu sağlamak için tip I intronların kendi kendini birleştirme fonksiyonuna dayanan PIE sistemine (ekzonların ve intronların hizalanması) dayalı circRNA'yı hazırlar. PIE yapısı, T4 td geni veya balıksı tRNA öncü geni kullanılarak tasarlanmıştır ve düzenleme aşağıdaki gibidir:
RNA intronu ve destekleyici ekson fragmanı iki parçaya bölünür (5' terminali ve 3' terminali), burada 5' terminal dizisi hedef dizinin kuyruğuna aktarılır, 3' terminal dizisi hedef dizinin önüne eklenir. hedef sekans ve hedef gen sekansı ortaya eklenir.
GTP katalizi altında PIE yapısı intron dışındaki dizilerin siklizasyonuna yol açar. Yaohai Bio-Pharma, makul bir siklizasyon oranı geliştirme stratejisiyle birleştirildiğinde, %4'den fazla bir siklizasyon oranıyla 80 kb'ye kadar dizilerin siklizasyonunu başarabilir.
Şekil 1. PIE sistemine dayalı circRNA'nın in vitro dolaşımı
Süreç | İsteğe Bağlı Hizmet | Servis Detayları | Teslimat Süresi (iş günü) |
circRNA dizisi tasarımı ve optimizasyonu | Kodlama dizilerinin tasarımı ve optimizasyonu |
CDS dizisi hizalaması CDS kodon optimizasyonu |
1 |
Kodlamayan dizilerin tasarımı ve optimizasyonu |
İntron ve ekzon dizisi tasarımı ve optimizasyonu Homolog kol dizisi tasarımı ve optimizasyonu Ara parça dizisi tasarımı ve optimizasyonu |
1-2 |
CircRNA Bileşenleri | Biyolojik Fonksiyonlar | Optimizasyon Stratejileri | |
İki terminalli intron ve ekzon dizileri | İntronun dışındaki dizilerin siklizasyonu için GTP ile katalize edilen intron kendi kendine birleşir. | T4 td genine veya balık yağı tRNA öncü genine göre tasarlanmıştır. | |
kodlama | IRES | CircRNA'nın çevirisini düzenleyen dahili ribozom tanıma bölgesi. | EMCV, CVB3 kaynakları gibi farklı viral kaynaklardan dahili ribozom giriş bölgesi (IRES) dizilerinin taranması. |
CDS | Protein kodlayan bölgeler, antijenleri, antikorları veya diğer fonksiyonel proteinleri kodlayan diziler. | Kodon optimizasyonu çeviri düzeyini artırır; bazı optimal olmayan kodonlar protein katlanmasında rol oynayabilir. | |
Kodlama dışı | Kodlamayan diziler | Gen veya protein regülasyonunu uygulamak için miRNA'ları veya proteinleri hedefleyin. | MiRNA'lar veya proteinler için spesifik bağlanma bölgelerinin hedeflenmesi, bağlanma bölgesinin dizilerini tekrarlayabilir. |
Yaohai Bio-Pharma, RNA'nın siklizasyonunu sağlamak için PIE sistemini temel alan kontrol ürünü geliştirilmiş yeşil floresan proteini (eGFP) circRNA'yı piyasaya sürdü.
Geleneksel bir transfeksiyon reaktifi kullanılarak eGFP circRNA, 293T hücrelerine transfekte edilir ve eGFP (yeşil) floresan sinyali 24 saat sonra tespit edilebilir; bu, 48 saat sonra güçlendirilecektir. Floresan sinyal, 7. gün ve sonraki 14. günde hala tespit edilebilir. transfeksiyon.
eGFP circRNA'nın in vitro ekspresyon doğrulaması