N-Glikozilasyon sit analizi, glikanların fonksiyonlarını anlamak için kritiktir. Yaohai Bio-Pharma, N-glikozilasyon siti için enzymatik kesildikten sonra Sıvı Kromatografi-Mass Spektrometri (LC-MS) kullanır.
Çeşitli büyük moleküllerin Protein Yapısal Karakterizasyonu konusunda çalıştık, bunların arasında Rekombinant Alt Birim Aşılar, Nanovüçgenler/VHH'ler/ Tek-domän Antikorlar (sdAbs), Antikor Parçaları, Hormonlar/Peptidler, Sito kinler, Büyüme Faktörleri (GF), Enzimler, Kolajenler vb. bulunur.
N-Glikozilasyon Sitası İçin Düzenleyici Gereksinimler
ICH Q6B rehberine göre, “glikoproteinler için karbonhidrat içeriği (nötr şekerler, amino şekiller ve sialik asitler) belirlenir. Ayrıca, karbonhidrat zincirinin yapısı, oligosakkarit deseni (antena profili) ve polipeptid zincirinin glikozilasyon sit(leri) mümkün olan en iyi ölçüde analiz edilir.”
Analitik Yöntem
Analiz |
Yöntemler |
N-glikozilasyon yeri |
Enzimatik kesildikten sonra Sıvı Kromatografi-Mass Spektrometri (LC-MS) |
İşlemler
1. Proteini trypsin veya diğer proteazlar kullanarak enzimatik olarak parçalama
2. Fragman glycopeptidleri ayırma
3. N-glikozilasyon sitelerini LC-MS ile doğrulama
4. Verileri analiz etme