MRNA'nin Çevre Dışı Sentezi
MRNA'nin ana bileşenleri 5’-cap, 5’-UTR, açık okuma çerçevesi (ORF), 3’-UTR ve 5’ poli A kuyruğu olup, bu bileşenler mRNA işlevini korumak için gerekli olanlardır. Araştırmacılar, mRNA dizilerini ve yapılarını tanımlamak ve optimize etmek için çeşitli yöntemler kullanmışlardır.
MRNA sentezi, doğrusal DNA şablonları, RNA polimerazları (T3, T7 veya SP6), değiştirilmemiş veya değiştirilmiş nükleotitler, enzimler ve uygun rejanterler kullanılarak çevresel dış transkript (IVT) temelinde gerçekleştirilir.
5’ Kap Modifikasyonu
Eukaryotik hücreden成熟的 mRNA dizileri, mRNA istikrarını ve çeviri etkinliğini artıran 5' ucunda bir 7-metilguanosin (m7G) kapa sahiptir. In vitro koşullarda mRNA yakalamak için iki genel yöntem vardır. İlk olarak, CleanCap gibi m7GpppG yapısının bir kap benzeri eklenerek IVT sistemi boyunca mRNA kapanabilir. Bu eşzamanlı transkripsiyon kapanma yöntemi, doğal bir 5' kapsül yapı sağlar ve kapanma verimliliğini neredeyse %90-%99'a çıkarır. İkinci olarak, in vitro transkripsiyon reaksiyonundan sonra takip eden haritalama enzim reaksiyonları ile de mRNA haritalaması yapılabilir.
PolyA Modifiği
Poly(A) kuyruğu aynı zamanda vivo koşullarında mRNA'nın yarı ömürünü uzatır ve mRNA çevrimiçi çeviri verimliliğini artırır. Amplifikasyon sonucu elde edilen poly(A) kuyruğunun uzunluğu 100-300 nükleotid olmalıdır. Ayrıca, değiştirilmiş adenosin hücre içi RNaz degradasyonuna karşı poly A kuyruğunun kararlılığını artırır. Poly A kuyruğu, poly A'yı kodlayan DNA şablonunu kullanarak in vitro transkripsiyon ile belirli bir poly A dizisi uzunluğuna sahip olarak eklenmesiyle elde edilebilir. Alternatif olarak, rekombinant poly A polimerazı, mRNA transkripsiyonundan sonra enzymatik poliadilasyon için kullanılabilir.
Nükleotitler Modifiyesi
Değiştirilmiş nükleozitler, desen tanıyıcı reseptörlerin (PRR) tanımını ve/veya aktivasyonunu engelleyebilir ve mRNA aşılarının etkinliğini iki tamamen farklı şekilde artırabilir. Pseudouridine (ψ), 1-metilpseudouridine (m1ψ), tiyounidine (s4U) ve 5-metil sitozin (m5C) gibi belirli kimyasal olarak değiştirilmiş nükleozitlerin eklenmesi, TLR7/8 ve diğer doğabilimsel bağışıklık reseptörlerinin aktivasyonunu önleyebilir ki bu da mRNA'nın bağışıklık tepkisini önemli ölçüde azaltır.
mRNA Teslim Sistemi
MRNA'nın işlevini korumak için, konak sitoplazmasına girmesi ve spesifik antijenleri ifade etmesi gerekmektedir. mRNA aşıları ve tedaviler açısından karşılaşılan en zor mevzalarından biri, yeterince yüksek çeviri düzeyleriyle hedef hücrelere mRNA'yı teslim etmek için son derece özel ve verimli mRNA teslim sistemlerine ihtiyaç duymasıdır. Dendritik hücreler (DCs), protamin, kationik polimerler ve kationik lizozomlar dahil olmak üzere birkaç mRNA teslim vektörü geliştirilmiştir ve kullanılmaktadır.
Katyonik lipitlerin mRNA ile kompleksleri ve diğer hazırlıklar 80-200 nm boyutunda nanopartiküller oluşturabilir ve bu yapıya lipid nanopartiküller (LNPs) denir. En gelişmiş mRNA teslimat sistemlerinden biri olan LNP, ionlaşabilir katyonik lipitler, doğal fosfolipitler, kolesterol ve polietilen glikol (PEG) içerir. Amerika Birleşik Devletleri Gıda ve İlaç İdaresi tarafından onaylanan birkaç RNA aşı ve tedavisi (siRNA ve mRNA), LNP teslimat sistemlerine dayanmaktadır.
Yaohai Bio-Pharma RNA için Tek Durak Çözüm Sunuyor
Özel Teslimatlar
|
Sınıf
|
Teslim Edilebilirler
|
Speksiyasyon
|
Uygulamalar
|
|
non-GMP
|
İlacı Madde, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Hücre transfeksiyonu, Analitik yöntem geliştirme, Ön-stabilite çalışmaları, Formülasyon geliştirme gibi ön klinik araştırmalar
|
|
İlaç Ürünü, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilite
|
İlacı Madde, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Investigational new drug (IND), Klinik deneme yetkilendirme (CTA), Klinik deneme tedariki, Biyolojik lisans başvurusu (BLA), Ticari tedarik
|
|
İlaç Ürünü, LNP-mRNA
|
5000 flakon veya önceden dolu şırıngeler/ kartuşlar
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
