Enzim Rekombinan

Modaliti

Enzim Rekombinan untuk Kegunaan Terapeutik

Enzim terapeutik yang diperoleh melalui proses bioteknologi digunakan secara meluas untuk beberapa aplikasi klinikal, termasuk terapi penggantian enzim, degradasi metabolit dan toksin terkumpul, rawatan kanser, dan penyuntingan genom. Beberapa enzim terapeutik boleh dihasilkan dalam sistem ekspresi mikrob.

Kesesuaian	Enzim	Bahan	Produk/Saluran Paip Biasa
Terapi Penggantian Enzim	Adenosine deaminase, ADA	Adenosin atau deoksiadenosin	Elapegademase-lvlr (Revcovi)
Terapi Penggantian Enzim	Phenylalanine ammonia lyase, PAL	Fenilalanina	Pegvaliase-pqpz (Palynziq)
Degradasi Metabolit Terkumpul	Urikase/Urat Oksidase	Asid urik	Peglticase (Krystexxa)Rasburicase (Fasturtec)
	Kolagenase	"parut" kolagen	Collagenase clostridium histolyticum (Xiaflex, Qwo, Santyl)
	Plasmin terpotong	Kolagen, fibronektin, dan laminin	Ocriplasmin (Jetrea)
	Pengaktif plasminogen tisu terpotong (tPA)	Plasminogen	Reteplase (Retavase)
	IgG protease	Imunoglobulin G (IgG)	Imlifidase (Idefrix)
	IgA protease	Imunoglobulin A (IgA)	PKU308/AP308IGAN IgA protease
Degradasi Toksin	Carboxypeptidase G2	Methotrexate	Glukarpidase (Voraxaze)
Rawatan kanser	Enzim khusus asparagine	Asparagine	Asparaginase (Elspar)Calaspargase pegol-mknl (Asparlas)
Penyuntingan Genom	Nuklease Cas9	Gen sasaran	Exagamglogene autotemcel (Exa-cel, CTX001)

Enzim Rekombinan sebagai Bahan

Terdapat beberapa enzim yang digunakan dalam penghasilan RNA pengekodan panjang (cth, mRNA, saRNA, circRNA), pengeluaran antibodi-drug conjugates (ADCs) dan lain-lain. Enzim yang dihasilkan oleh mikrob adalah lebih menjimatkan kos daripada sel mamalia, terutamanya sistem ekspresi E. coli.

Kesesuaian	Enzim	fungsi
Enzim untuk Pengeluaran RNA Linear, bebas RNase	Endonuklease sekatan	Linearisasi DNA plasmid (pDNA) untuk mengelakkan penjanaan transkrip yang lebih panjang.
	T7 RNA polimerase (T7 RNAP)	Ikat pada promoter T7 dan jana transkrip RNA tertentu; Memainkan peranan penting semasa tindak balas transkrip in vitro (IVT).
	Enzim pembatas Vaccinia	Tambahkan struktur Cap pada hujung 5′ IVT mRNA.
	Pyrophosphatase, bukan organik (iPPase)	Cegah pirofosfat semasa tindak balas IVT.
	Perencat RNase, rekombinan	Menghalang aktiviti RNase semasa tindak balas IVT.
	DNase I	Keluarkan templat DNA.
Enzim untuk pengeluaran circRNA, bebas RNase	RNase R	Mencerna RNA linear dan memperkayakan RNA bulat.
Konjugasi glycan yang dimediasi enzim	Peptida-N-glikosidase (PNGase F)	Memutuskan ikatan amida antara GlcNAc sakarida pertama dan rantai sisi Asn297L; Melepaskan glycans daripada antibodi IgG.
	Transglutaminase bakteria (BTG)	Konjugatkan muatan tapak khusus untuk menjana ADC.
	Sortase A	Memangkinkan pengikatan protein.
	β1,4-galactosidase	Lepaskan semua galaktosa terminal dan bentuk isoform G0 homogen bagi antibodi.
	β1,4-galactosiltransferase (Gal-T)	Pindahkan sisa gula dengan kumpulan berfungsi reaktif secara kimia.
	α2,6-sialyltransferase (Sial T)	Menggabungkan sisa asid sialik terminal ke dalam struktur glycan asli antibodi.
Pengubahsuaian glycan yang dimediasi enzim dan kejuruteraan glikogen	Endo-N-acetylglucosaminidase (ENGase)	Hidrolisis ikatan β1,4-glikosidik antara GlcNAcβ1–4GlcNAc N-glycans; Keluarkan glycan berkait N pada kawasan Fc antibodi IgG.
	Endoglycosidase S (EndoS)
	Glycosyltransferases (GTs)	Pindahkan N-glycan oxazoline kepada IgG yang telah dinyahfukosilasi.
Lain-lain	Enzim yang dihasilkan oleh ketegangan mikrob	Keperluan tersuai

Enzim Rekombinan sebagai Reagen

Protease Pembuangan Tag

Tag gabungan sering digunakan untuk meningkatkan keterlarutan dan kestabilan protein rekombinan yang diminati dan menjadikannya lebih mudah untuk ditulenkan. Tag yang biasa digunakan termasuk tag-Nya, protein pengikat maltosa (MBP), glutathione-s-transferase (GST), dsb.

Biasanya, jujukan pemaut ditambah antara tag gabungan dan jujukan protein sasaran untuk mengalih keluar tag. Penyingkiran tag gabungan memerlukan protease khusus tapak, seperti enterokinase (EK), trombin, protease virus goresan tembakau (TEVp), protease rhinovirus manusia 3C (HRV3C), protein pengubah suai ubiquitin kecil (SUMO) protease, virus mottling vena tembakau ( TVMV) protease, dan carboxypeptidase A/B (CPA/CPB).

Jenis	Enzim	Tapak Pengiktirafan
Endoprotease penyingkiran tag	Enterokinase (EK), enteropeptidase	DDDDK↓
	trombin	LVPR↓GS
	protease TEV	ENLYFQ↓G
	HRV3C protease	LEVLFQ↓GP
	SUMO protease	Struktur tertiari SUMO
	protease TVMV	ETVRFQG↓S
Eksoprotease penyingkiran tag	Carboxypeptidase A (CPA)	Asid amino terminal C, kecuali Pro, Lys dan Arg
Eksoprotease penyingkiran tag	Carboxypeptidase B (CPB)	C-terminal Lys dan Arg

Protease, Nuklease dan Amidase Lain

Kesesuaian	Enzim	fungsi
Protease lain	Protease K	Protease serin yang mencerna protein dengan menghidrolisis ikatan peptida.
	IdeS, IgG protease	Enzim (Ides) merendahkan IgG yang membelah pada tapak khusus imunoglobulin G (IgG), menghasilkan serpihan Fab dan Fc
	IgA1 protease	Enzim proteolitik yang membelah tapak tertentu dalam jujukan rantau engsel imunoglobulin A1 (IgA1) manusia.
Nuklease	Nuklease	Memecah asid nukleik (DNA atau RNA) dengan menghidrolisis ikatan fosfodiester.
Nuklease	Hadkan enzim	Endonuklease yang membelah DNA pada atau berhampiran tapak tertentu.
Amidase	PNGase F	Membelah antara N-acetylglucosamine (GlcNAc) paling dalam dan sisa asparagin bagi oligosakarida tinggi mannose, hibrid dan kompleks.

Yaohai Bio-Pharma Menawarkan Penyelesaian CDMO Sehenti untuk Enzim Rekombinan

rujukan:

[1] Hennigan JN, Lynch MD. Masa lalu, sekarang dan masa depan terapi berasaskan enzim. Discov Dadah Hari Ini. 2022 Jan;27(1):117-133. doi: 10.1016/j.drudis.2021.09.004.

semua Kategori

Enzim Rekombinan

Modaliti