DNA bulatan kecil (mcDNA) ialah vektor DNA bukan virus yang lebih kecil yang diperoleh daripada struktur seperti DNA plasmid ibu bapa. DNA bulatan kecil berbeza daripada DNA plasmid konvensional kerana ia mengandungi promotor dan gen kepentingan (GOI), tanpa asal replikasi (ORI) dan penanda pemilihan (selMark). DNA bulatan kecil dihasilkan dalam bakteria melalui penggabungan semula in vivo untuk membuang jujukan tambahan (dipanggil mini-plasmid) daripada DNA plasmid. Disebabkan keselamatannya, DNA bulatan kecil telah mendapat populariti sebagai vektor bukan virus untuk terapi gen, vaksin DNA, dsb.
Rajah 1. Struktur DNA Plasmid (pDNA) dan DNA Bulatan Mini (mcDNA)
Sistem Penggabungan Semula DNA Bulatan Mini
Terdapat empat DNA bulatan mini utama dalam sistem penggabungan semula vivo yang telah dikaji, termasuk Phage λ integrase, Phage P1 Cre recombinase, ParA resolvase, PhiC31 integra se/I-SceI.
Strategi
|
Phage λ integrase
|
Phage P1 Cre rekombinase
|
Penyelesaian ParA
|
PhiC31 integra se/I-SceI
|
Mekanisme
|
Tyrosine recombinase, yang berfungsi melalui protein FIS dan IHF untuk memangkinkan penggabungan semula tapak hibrid att
|
Tyrosine recombinase khusus tapak, yang melakukan penggabungan semula dua arah apabila mengikat pada tapak loxP
|
Serine recombinase, yang melakukan penggabungan semula tidak boleh balik dan satu arah antara dua tapak MRS yang serupa
|
Serine recombinase, yang mengantara penggabungan semula satu arah antara tapak pengikatan attP/attB, manakala I-SceI endonuclease memecahkan kekotoran berkaitan produk dan plasmid ibu bapa yang tidak digabungkan
|
Ciri-ciri
|
Bergantung pada ungkapan faktor tuan rumah FIS dan IHF; ketoksikan intrinsik; Baki plasmid ibu bapa dan plasmid mini
|
Baki plasmid ibu bapa dan plasmid mini
|
Hasil yang tinggi; Baki plasmid ibu bapa dan plasmid mini
|
Degradasi plasmid ibu bapa yang berkaitan mengurangkan hasil
|
Yaohai Bio-Pharma Menawarkan Penyelesaian CDMO Sehenti untuk DNA Bulatan Mini
rujukan:
[1] Almeida AM, Queiroz JA, Sousa F, Sousa Â. DNA bulatan kecil: Masa Depan untuk Vektor Berasaskan DNA? Trend Bioteknol. 2020 Okt;38(10):1047-1051. doi: 10.1016/j.tibtech.2020.04.008.