Pembangunan Proses Huluan

CDMO mikrob

Kepentingan Pembangunan Proses Huluan

Proses huluan (USP), juga dikenali sebagai proses penapaian, adalah salah satu fasa awal biopemprosesan huluan. Proses penapaian mikrob adalah penting untuk kultur sel berketumpatan tinggi dan ekspresi gen eksogen, yang secara langsung memberi kesan kepada hasil dan kos biologi.

Pada peringkat awal pembangunan biologi (pra-klinikal atau fasa 1/2), tumpuannya adalah untuk membangunkan proses bebas haiwan berskala dengan hasil pertengahan dan memenuhi semua standard kualiti produk.

Semasa di peringkat akhir (fasa 3 atau komersial), kami akan menumpukan pada hasil, keteguhan, kebolehskalaan dan kebolehulangan, menjana proses yang menjimatkan kos. Aktiviti yang menangani isu ini ialah kajian pencirian proses dan pengesahan proses. Sementara itu, alatan kualiti mengikut reka bentuk (QbD) dan reka bentuk eksperimen (DoE) biasanya digunakan.

Kata kunci: pembangunan proses, pengoptimuman dan pengesahan, proses penapaian, penapaian sel mikrob, penapaian bakteria, penapaian yis, penapaian berketumpatan tinggi, penapaian terikan kejuruteraan

Permohonan: Industri biofarmaseutikal, perubatan manusia, perubatan haiwan, vaksin, biologi molekul besar rekombinan, biologi rekombinan, reagen biologi

Penyelesaian USP Yaohai Bio-Pharma

Mendapat manfaat daripada lebih 10 tahun pengalaman penapaian mikrob, Yaohai Bio-Pharma mempunyai kepakaran untuk membantu menyelesaikan cabaran proses penapaian. Kita boleh dengan pantas mewujudkan strategi penapaian berketumpatan tinggi untuk Escherichia coli (E. coli) rembesan periplasmik, ekspresi badan larut atau inklusi intrasel, dan ekspresi ekstrasel atau intrasel Yis.

Perkhidmatan pembangunan penapaian am kami yang tersedia termasuk:

Reka bentuk proses penapaian dilakukan pada skala kecil 7L dalam mod kumpulan suapan
Pengesahan proses tiga kelompok dalam penapai 7L
Skala proses pertengahan sehingga 30L/70L

Kami boleh melakukan pengoptimuman berbilang parameter secara fleksibel untuk memenuhi hasil atau perkadaran yang diingini, menggunakan One-Time-A-Factor (OTAF) atau Design-of-experiments (DoE).

Parameter penapaian utama disenaraikan seperti berikut:

Komposisi media penapaian bebas haiwan

Bebas antibiotik atau tidak, isipadu Inokulum

Suhu pertumbuhan, pH, paras oksigen terlarut (DO).

Mod suapan (cth, kumpulan suapan)

Kepekatan induser (cth, IPTG, metanol), Titik aruhan (berat basah sel/OD600),

Suhu aruhan, masa aruhan

dan lain-lain.

Butiran Perkhidmatan

Perkhidmatan	Aliran proses
Penanaman dalam Kelalang Goncang(500 mL)	Penyediaan media tanpa haiwan → Penanaman benih mikrob → Penanaman dalam shaker → Induksi → Penuaian
Penanaman dalam Penapai (7 L)	Penyediaan media bebas haiwan → Penanaman benih mikrob → Penapaian sel berketumpatan tinggi dalam bioreaktor 7L → Induksi → Tuai
Kawalan Kualiti Protein/Peptida	Prarawatan Ekspresi larut intraselular: Penuaian dan penggantungan semula sel mikrob → Penghancuran ultrasonik → Penyingkiran serpihan sel → Ekstrak mentah Ekspresi badan kemasukan: Penuaian dan penggantungan semula sel mikrob → Penghancuran ultrasonik → Penyediaan badan kemasukan → Ekspresi larut ekstraselular Ekstrak mentah → Pengumpulan supernatan kultur pertukaran → Ekstrak mentah Analisis kualiti Ekstrak mentah sebagai sampel → Analisis protein sasaran oleh SDS PAGE atau Western blotting (WB)
Kawalan Kualiti Plasmid	Prarawatan dan Analisis Kualiti Pengekstrakan Plasmid → Analisis DNA oleh elektroforesis gel agarose

Kajian kes

Kami ditugaskan oleh pelanggan kami untuk meningkatkan hasil hormon polipeptida sasaran daripada 8 g/L kepada 10 g/L.

Berdasarkan Reka Bentuk Faktor Penuh dan Reka Bentuk Permukaan Tindak Balas dalam alatan DoE, kami dengan pantas mengenali dan mengoptimumkan parameter penapaian utama. Di bawah proses penapaian ketumpatan sel tinggi yang dioptimumkan, tahap ekspresi meningkat kepada 10 g/L.

pengalaman kami

Kami telah mengusahakan pelbagai jenis perumah mikrob, contohnya, E.coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) and Hansenula polymorpha (H. polymorpha).
Kami berpengalaman dengan E. coli rembesan periplasmik, ekspresi badan larut dan inklusi, serta ekspresi intrasel atau ekstrasel Yis. Hasil badan rangkuman adalah sehingga 10g/L, manakala hasil protein larut antara 0.5 hingga 15g/L.
Kami telah terlibat dalam pembangunan dan pembuatan pelbagai molekul besar, termasuk vaksin subunit rekombinan, zarah seperti virus (VLP), hormon (insulin, GLP-1, hormon pertumbuhan), sitokin (Interleukin-2/IL-2, IL -15, IL-21), faktor pertumbuhan (EGF, FGF, NGF), nanobodies/ antibodi domain tunggal (sdAbs), enzim, dsb.
Equipment

Sistem Penapaian 7L*16

Penganalisis Bio Cedex, penganalisis Bioproses

semua Kategori

Pembangunan Proses Huluan

CDMO mikrob