Protein rekombinan sering melihat pengoksidaan rantai sampingan asid amino yang terdedah, seperti tryptophan (Trp) dan metionin (Met), mengubah sifat fizikokimia protein. Perubahan ini seterusnya boleh menyumbang kepada mengubah fungsi biologi protein yang terjejas, seperti kehilangan pengikatan, pengurangan aktiviti enzimatik, pelepasan cepat yang tidak dijangka. Protein adalah sasaran penting untuk tindak balas oksidatif kerana ia bertindak balas dengan cepat dengan oksidan dan banyak terdapat dalam sel, tisu ekstraselular, dan cecair badan.
Oleh itu, pemantauan pengoksidaan protein adalah penting untuk pembangunan biofarmaseutikal yang berjaya.
Yaohai Bio-Pharma menawarkan perkhidmatan analisis pengoksidaan asid amino, yang membolehkan anda menentukan pengoksidaan asid amino oleh Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS).
Kami telah terlibat dalam Pencirian Struktur Protein pelbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodies/ VHHs/ Antibodi domain tunggal (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptida, Sitokin, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dan lain-lain.
Keperluan Kawal Selia untuk Pengoksidaan Asid Amino
Menurut garis panduan ICH Q6B, bentuk teroksida boleh dikesan dan dicirikan oleh kaedah analisis kromatografi, elektroforetik dan/atau lain-lain yang berkaitan (cth, Kromatografi Cecair Prestasi Tinggi (HPLC), elektroforesis kapilari, spektroskopi jisim, dichroism bulat).
Kaedah Analisis
| Analisis |
Kaedah |
| Pengoksidaan Asid Amino |
LC-MS, Kromatografi Cecair Berprestasi Tinggi Fasa Terbalik (RP-HPLC) atau Kromatografi Interaksi Hidrofobik Kromatografi Cecair Berprestasi Tinggi (HIC-HPLC) dan spektrometri jisim |
Prosedur Analisis
1. Penyediaan sampel
2. LC-MS
3. Analisis data
Sisa triptofan (Trp) sangat terdedah kepada pengoksidaan kerana kereaktifan tinggi indole aromatik dengan spesies oksigen reaktif. Pengoksidaan Trp memerlukan sedikit pendedahan sisa Trp yang biasanya tertimbus dalam struktur tiga dimensi protein.
Walau bagaimanapun, apabila sisa Trp dioksidakan, ia boleh berubah menjadi pelbagai produk dengan sifat yang sangat berbeza daripada Trp asal. Laluan yang paling biasa untuk pengoksidaan Trp termasuk pembentukan N-formilkinurenine (Perbezaan jisim: +32).
Satu lagi asid amino yang biasa teroksida ialah metionin. Atom sulfur dalam residu Met boleh menerima sama ada satu atau dua atom oksigen yang membawa kepada pembentukan sulfoksida (Perbezaan jisim: +16) atau sulfon (Perbezaan jisim: +32), yang sepadan. Pengubahsuaian ini agak biasa disebabkan oleh pendedahan permukaan Met yang biasanya tinggi.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
