MRNA bulat (circular mRNA) telah digunakan secara meluas dalam kajian gen atau fungsi protein. Sementara itu, ia popular dalam pembangunan biologi prophylactic dan terapeutik, serupa dengan mRNA.
Yaohai Bio-Pharma telah menubuhkan satu set teknologi sintesis circRNA untuk menyediakan RNA berkualiti tinggi, seperti reka bentuk jujukan dan pengoptimuman, transkripsi in vitro (IVT), pekeliling/cyclization, penulenan, dan enkapsulasi partikel nano lipid (LNP). Semua produk dikeluarkan di bawah piawaian kawalan kualiti (QC) yang ketat.
Berbanding dengan mRNA linear, RNA bulat (circular RNA) adalah lebih stabil dalam struktur dan merupakan titik panas utama dalam penyelidikan ubat asid nukleik semasa. Ia mempunyai pelbagai aplikasi dalam bidang yang berbeza, sama ada sebagai circRNA pengekodan atau circRNA bukan pengekodan, termasuk vaksin profilaksis untuk penyakit berjangkit, vaksin onkologi terapeutik, ubat onkologi terapeutik, terapi penggantian protein, ubat regeneratif, terapi sel dan gen (CGT) , peranan span molekul dan aptamer RNA.
Proses | Perkhidmatan Pilihan | Butiran Perkhidmatan | Tempoh Penghantaran (hari) |
Reka Bentuk dan Pengoptimuman Jujukan circRNA | Reka Bentuk dan Pengoptimuman Urutan Pengekodan | Pengoptimuman Kodon CDS | 1 |
Reka Bentuk dan Pengoptimuman Urutan Bukan Pengekodan | Jujukan Intron dan Exon, Reka Bentuk dan Pengoptimuman Lengan Homolog dan Spacer | 1-2 | |
Penyediaan Plasmid Pekeliling | Sintesis Gen | Sintesis Gen (Pihak Ketiga) | 7-10 |
Penguatan Plasmid | Penguatan Plasmid | 2 | |
Pengekstrakan Plasmid | |||
Penyediaan Plasmid Linear | Linearisasi dan Pemurnian Plasmid | Linearisasi Plasmid | 1 |
Pembersihan DNA Linearisasi | |||
Transkripsi dan Kitaran In Vitro | Transkripsi dan Kitaran In Vitro | Transkripsi In Vitro dan Tindak Balas Kitaran | 1-2 |
Pencernaan RNase R | |||
Pengoptimuman-pilihan | Komposisi Reaksi, Pengoptimuman Masa | 2-5 | |
Pembersihan circRNA | Kaedah Pemurnian Konvensional | Kerpasan Litium Klorida | 1 |
Pemurnian Manik Magnet | 1 | ||
Pembersihan circRNA yang Sangat Tulen | Kromatografi Cecair Berprestasi Tinggi Persediaan (HPLC) | 1-2 | |
Pertukaran Penampan | Ultrafiltration | 1 | |
circRNA Lyophilization | Pengisian Sampel | Pengisian | 2-3 |
Liofilisasi | Pra-pembekuan | ||
Pengeringan Utama (Pemejalwapan) | |||
Pengeringan Sekunder (Desorpsi) | |||
Enkapsulasi circRNA-LNP | Enkapsulasi LNP | Bahan dan Prarawatan Cecair | 2 |
Pencampuran Peranti Mikrobendalir | |||
Pertukaran Penampan | Penapisan Aliran Tangensial | 1 | |
Mensterilkan | Penapisan | ||
Kawalan Kualiti DNA Plasmid | Kepekatan / kesucian | Spektrofotometri Ultraviolet (UV). | 1-2 |
Konformasi plasmid | Elektroforesis Gel Agarose (AGE) | ||
Elektroforesis Kapilari (CE)-Pilihan | |||
mengenal pasti plasmid | Pengecaman Enzim Sekatan/AGE | ||
Kawalan Kualiti circRNA | Kepekatan / kesucian | Spektrofotometri Ultraviolet (UV). | - |
Kesucian | Elektroforesis Gel Agarose (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-pilihan | 1 | ||
Kawalan Kualiti circRNA-LNP | Kecekapan Enkapsulasi | Kaedah RiboGreen | 1 |
Saiz Zarah | Penyebaran Cahaya Dinamik (DLS) | 1 | |
Indeks Polidispersi | Penyebaran Cahaya Dinamik (DLS) | 1 | |
Potensi Zeta | Penyebaran Cahaya Dinamik (DLS) | 1 | |
Ujian Potensi berasaskan sel | Pemindahan Sel | Penyaduran sel, pemindahan sel | 4 |
Pengesanan Protein Sasaran | Pemerhatian pendarfluor, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Kami mengalihkan circRNA protein pendarfluor hijau yang dipertingkatkan (eGFP circRNA), circRNA mCherry, luciferase circRNA ke dalam sel 293T, dan mengesan protein sasaran melalui isyarat pendarfluor, luminescent atau warna, western blot (WB), ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA).
Ujian Potensi Berasaskan Sel bagi Sampel circRNA oleh Yaohai Bio-Pharma