MRNA bulat (circRNA) telah digunakan secara meluas dalam kajian fungsi gen atau protein. Pada masa yang sama, ia popular dalam pembangunan biologik preventif dan terapeutik, serupa dengan mRNA.
Yaohai Bio-Pharma telah membina satu set teknologi sintesis circRNA untuk menyediakan RNA berkualiti tinggi, seperti reka bentuk urutan dan optimasi, transkripsi dalam bikar (IVT), pemberingkatan/pengelilingan, pemurnian, dan penyampulan dalam nanopartikel lemak (LNP). Semua produk dikeluarkan di bawah piawaian kawalan kualiti (QC) yang ketat.
Berbanding dengan mRNA linear, circRNA (circular RNA) lebih stabil dalam struktur dan merupakan titik panas utama dalam penyelidikan ubat asid nukleik semasa. Ia mempunyai pelbagai aplikasi dalam bidang yang berbeza-beza, sama ada sebagai circRNA pengodean atau bukan pengodean, termasuk vaksin preventif untuk penyakit menular, vaksin onkologi terapeutik, ubat onkologi terapeutik, terapi penggantian protein, perubatan regeneratif, terapi sel dan gen (CGT), peranan spons molekul dan aptamer RNA.
Proses | Perkhidmatan Pilihan | Butiran Perkhidmatan | Tempoh Penghantaran (hari) |
reka Bentuk dan Optimumkan Urutan circRNA | Reka bentuk dan optimumkan urutan kod | Pengoptimuman Kodon CDS | 1 |
Reka bentuk dan optimasi urutan tak bertindak | Intron dan Urutan Ekson, Reka Bentuk dan Pengoptimuman Lengan Homolog dan Penyambung | 1-2 | |
Penyediaan Plasmid Bulat | Sintesis gen | Pembentukan Gen (Pihak Ketiga) | 7-10 |
Peningkatan Plasmid | Peningkatan Plasmid | 2 | |
Penstrakan Plasmid | |||
Persediaan Plasmid Linear | Linearisasi plasmid dan pemurnian | Linearisasi plasmid | 1 |
Pemurnian DNA Linear | |||
Transkripsi In Vitro dan Siklitisasi | Transkripsi In Vitro dan Siklitisasi | Tindak Balas Transkripsi In Vitro dan Siklitisasi | 1-2 |
Pencernaan RNase R | |||
Optimization-pilihan | Komposisi Tindak Balas, Pengoptimuman Masa | 2-5 | |
purifikasi circRNA | Kaedah Pemurnian Konvensional | Penyucian lithium klorida | 1 |
Pemurnian bead magnetik | 1 | ||
Pemurnian circRNA Bertahan Tinggi | Kromatografi Likat Berprestasi Tinggi (HPLC) untuk Penyediaan | 1-2 | |
Tukar pegeraian | Ultrafiltrasi | 1 | |
pelapisan circRNA | Isi Contoh | Pengisian | 2-3 |
Liofilisasi | Pembekuan prasebelum | ||
Keringan pertama (sublimasi) | |||
Keringan kedua (desorbsi) | |||
pengekapan circRNA-LNP | Penyampulan LNP | Pra-pengolahan Bahan dan Cecair | 2 |
Campuran Peranti Mikrofluidik | |||
Tukar pegeraian | Penapisan aliran tangensial | 1 | |
Sterilkan | Penapisan | ||
Kawalan Kualiti DNA Plasmid | Ketumpatan/pureti | Spektrofotometri Ultraviolet (UV) | 1-2 |
Konformasi Plasmid | Elektroforesis Gel Agarosa (AGE) | ||
Elektroforesis Kapiler (CE)-Pilihan | |||
Kenalpasti Plasmid | Kenalpasti Enzim Pembatasan/AGE | ||
Kawalan Kualiti circRNA | Ketumpatan/pureti | Spektrofotometri Ultraviolet (UV) | - |
Kekalahan | Elektroforesis Gel Agarosa (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-pilihan | 1 | ||
Kawalan Kualiti circRNA-LNP | Ketepatan Pensampulan | Kaedah RiboGreen | 1 |
Saiz Zarah | Penggegaran Cahaya Dinamik (DLS) | 1 | |
Indeks Polidispersiti | Penggegaran Cahaya Dinamik (DLS) | 1 | |
Keupayaan Zeta | Penggegaran Cahaya Dinamik (DLS) | 1 | |
Ujian Keupayaan Berasaskan Sel | Transfeksi Sel | Penyusunan sel, transfeksi sel | 4 |
Pengesanan Protein Sasaran | Pemerhatian fluoresen, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Kami telah mentransfeksi RNA bulat (circRNA) protein fluoresen hijau diperkuat (eGFP circRNA), mCherry circRNA, dan luciferase circRNA ke dalam sel 293T, dan mengesan protein sasaran melalui isyarat fluoresen, cahaya, atau warna, western blot (WB), ujian immunoenzim terikat (ELISA).
Ujian Keupayaan Berasaskan Sel bagi Sampel circRNA oleh Yaohai Bio-Pharma