Sintesis saRNA tersuai
MRNA penguat diri (saRNA), juga dikenali sebagai RNA replika, mengekod jujukan mRNA transkripsi in vitro (IVT) dan gen replika virus yang diperoleh daripada alphavirus atau flavivirus. Gen replika virus membenarkan penguatan diri mRNA, yang menghasilkan peningkatan ekspresi protein dan dos RNA minimum yang diperlukan berbanding dengan mRNA yang tidak menguatkan. Aspek lain ialah saRNA ialah molekul yang agak besar (lebih daripada 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma telah mewujudkan satu set teknologi sintesis mRNA untuk menyediakan mRNA bukan penguat dan mRNA penguat diri (1000 nt~14000 nt), seperti reka bentuk jujukan dan pengoptimuman, IVT, penulenan, liofilisasi dan pengkapsulan partikel nano lipid (LNP). . Semua produk dikeluarkan di bawah piawaian kawalan kualiti yang ketat.
Rajah.1 Ciri-ciri Struktur mRNA IVT: mRNA Konvensional, Pekeliling dan Penguat Sendiri.
Ciri Urutan mRNA penguat sendiri
RNA penguat diri terdiri daripada empat protein bukan struktur (ditetapkan sebagai nsP1, nsP2, nsP3, dan nsP4), yang berasal daripada alphavirus, virus ensefalitis kuda Venezuela (VEEV). Antaranya, nsP1 mempamerkan aktiviti dwi enzimatik, iaitu GTase dan N7MTase, manakala nsP2 mempunyai aktiviti RTPase, yang penting untuk mengehadkan mRNA IVT untuk menghasilkan struktur Cap 0. Selain itu, nsP2 berfungsi sebagai protease dan helikase, memudahkan pemprosesan rumit keseluruhan kompleks nsP. Fungsi tepat nsP3 masih sukar difahami, namun ia terlibat dalam interaksi dengan pelbagai protein sel perumah, dengan itu menyumbang kepada pengecilan tindak balas antivirus yang dipasang oleh perumah.
Rantau promoter subgenomik alphavirus (SGP) terletak sebelum gen kepentingan (GOI). Elemen SGP memudahkan permulaan transkripsi GOI dengan memintas bacaan urutan pengekodan protein nsP virus.
Rajah.2 Sintesis dan ujian sel saRNA eGFP bagi Platform RNASci Bio-Pharma Yaohai.
Penyelesaian Tersuai saRNA
Protokol sintesis saRNA adalah serupa dengan mRNA: Sintesis mRNA tersuai
- Reka Bentuk Urutan
- Penyediaan Templat Plasmid
- transkripsi in vitro (IVT)
- Pembatasan Enzimatik mRNA
- Pembatasan Transkripsi Bersama mRNA
- Pembersihan mRNA
- mRNA Lyophilization
- Enkapsulasi LNP
- Analisis dan Pengujian
MS
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
BE
MK
UR
BN
